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石蜡切片的苏木精-伊红HE染色详解


      苏木精-伊红染色方法,简称HE染色方法,是生物学和医学的细胞与组织学最广泛应用的染色方法。在病理学实验室中称为常规染色方法。病理细胞和组织学的诊断,教学和研究都是用HE染色方法观察正常和病变组织的形态结构。因此病理学工作者必需学习和掌握这种染色方法。


(一)HE染色的基本原理

 1.细胞核染色的原理

      细胞核内的染色质主要是去氧核糖核酸(DNA),DNA的双螺旋结构中,两条链上的磷酸基向外,带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木精硷性染料以离子键或氢键结合而染色。苏木精在碱性染料中呈蓝色,所以细胞核被染成蓝色。

2.细胞浆染色的原理

      细胞浆内主要成分是蛋白质,在染液中加入醋酸使胞浆带正电荷(阳离子),就可被带负电荷(阴离子)的染料染色。伊红Y是一种化学合成的酸性染料,在水中离解成带负电荷的阴离子,与蛋白质的氨基正电荷(阳离子)结合而使细胞浆染色,细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色,与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。伊红是细胞浆的良好染料。

      随着科学技术快速发展和电子计算机的广泛应用,染色自动仪器的出现,许多实验室已用全自动染色机代替人工染色。


(二)人工操作苏木精伊红染色方法

 1.染色步骤

      二甲苯I脱蜡10min.

      二甲苯II脱蜡5min

      无水乙醇洗去二甲苯1min×2次。

      95%酒精1min

      90%酒精1min

      85%酒精1min

      自来水洗2min

      苏木精染色1min5min

      自来水洗1min

      1%盐酸酒精分化20s

      自来水洗1min

      稀氨水(1%)反蓝30s

      自来水洗或蒸馏水洗1min

      伊红染色20s5min

      自来水洗30s

      85%酒精脱水20s

      90%酒精30s

      95%I酒精1min

      95%II酒精1min

      无水乙醇I 2min

      无水乙醇II 2min

      二甲苯I 2min

      二甲苯II 2min

      二甲苯III 2min

      中性树胶或加拿大树胶封片。

2.染色结果

      细胞核呈蓝色,细胞浆、肌肉、结缔组织、红细胞和嗜伊红颗粒呈不同程度的红色。钙盐和各种微生物也可染成蓝色或紫蓝色。


(三)染色液的配制

1.苏木精(素)

      苏木精是一种纯天然染料,是从苏木素树提炼出来的,苏木树主产墨西哥的坎偑切,苏木精的染色性能差,经过一百多年精心加工配制,现用的苏木精配方,染色性能好,保持时间长,是世界上唯一的常规细胞核染料,

2.苏木精的配制

     苏木精的配方很多,可根据不同需要选用,Harris配方最常用。

1Harris苏木精的配制

       苏木精1g

      硫酸铝钾15g

      无水乙醇10ml

      蒸馏水200ml

      先用蒸馏水加热溶解硫酸铝钾,用无水乙醇溶解苏木精再倒入已溶解的硫酸铝钾蒸馏水中,煮沸1min后,稍冷却,慢慢加入红色氧化汞0.5g,继续加热至染液变为紫红色,用纱布盖瓶口,用前滤纸过滤后每100ml加冰醋酸5ml

2Mayer苏木精改良配法

      A液

      苏木精2g

      无水乙醇40ml

      B液

      硫酸铝钾100g

      蒸馏水600ml

      稍加热使硫酸铝钾在水中溶解,将苏木精溶于酒精中,再将A液与B液混合煮沸2min。用蒸馏水补足600ml,加入400mg碘酸钠充分混匀,苏木精染液呈紫红色。

3Gill改良苏木精染液的配制

      苏木精2g

      无水乙醇250ml

      硫酸铝钾17g

     蒸馏水750ml

      碘酸钠0.2g

      冰醋酸20ml

      先将苏木精溶于无水乙醇,再将硫酸铝钾溶于蒸馏水中。两液溶解后将其混合,加入碘酸钠待苏木精氧化成紫红色,再加入冰醋酸。

3.伊红溶液的配制

1)水溶性伊红

      伊红Y0.51g

       蒸馏水100ml

      先将水溶性伊红加入蒸馏水中,用玻璃棒将伊红搅起泡沫后过滤,每100ml加冰醋酸1滴。

2)乙醇性伊红液的配制

      伊红Y 0.51g

       90%酒精100ml

       先将伊红溶于酒精中,用玻璃棒研碎溶解后,每100ml加冰醋酸1滴。用乙醇性伊红液染细胞浆后不可经水洗直接用85%酒精脱水。

4.盐酸酒精分化液的配制

       浓盐酸0.51ml

      75%酒精99ml

       此液用一段时间后需要延长或更换液体,新液分化时间要短。

      此文转载:丁香通

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