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免疫荧光二

2 间接法又称为荧光抗-抗体法

j 需要两种抗体参与,即一抗和二抗(荧光素标记)。一抗对标本中的抗原来说起抗体的作用,但对荧光标记的二抗来说又起着抗原作用。

–  可用来检测标本中未知抗原,也可检测血清中未知抗体。

k间接免疫荧光法操作步骤

•  标本的处理及非特异染色的封闭同直接法;

•  一抗染色:

–  加未标记的特异性抗体(通常1:100稀释,用0.01MpH7.4PBS稀释)37°C作用30min4°C过夜。

•  0.01M PBST漂洗5min×3(震荡漂洗)

•   加荧光标记的二抗抗体,37°C湿盒避光作用30min

•  0.01M PBST避光漂洗5min×3(例如包上锡纸,在摇床上漂洗)

•  甘油缓冲液封片

•  镜检

•  优点:敏感性较高,比直接法高10倍左右;制备一种荧光标记抗体,可应用于多种一抗;

•  缺点:是参加反应的因子较多,产生非特异性染色的机会增多。

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