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【动物实验】-Foxo3a基因调控大鼠卵巢颗粒细胞体外发育及预防顺铂对卵巢的毒性作用

目的:研究Foxo3a基因在大鼠卵巢颗粒细胞体外发育中的调控作用及对顺铂卵巢毒性的预防作用。

方法:在体外培养大鼠原代颗粒细胞,通过HE染色和免疫荧光鉴定原代颗粒细胞;构建具有Foxo3a基因的重组腺病毒AD-rFoxo3a,RT-PCR和Western blot检测到Foxo3a的表达。实验分为三组:实验组(AD-rFoxo3a组),阴性对照组(rAD组)和空白对照组(对照组)。绘制每组的细胞生长曲线,并通过蛋白质印迹法检测每组中的细胞周期蛋白D1、 ,P27,Bax,Bim蛋白表达,流式细胞术,Hoechst33342/PI方法用于检测细胞周期和凋亡,流式细胞术用于在各组细胞之前添加最佳浓度的顺铂。检测到细胞凋亡。

结果:(1)体外分离培养的大鼠原代卵巢颗粒细胞活力为90%,细胞纯度为95%;(2)Foxo3a基因重组在感染腺病毒AD-rFoxo3a的颗粒细胞中,在36小时后在mRNA水平上高表达,在感染后48小时在蛋白水平上高表达;(3)实验组G1期细胞生长受到抑制与空白对照组和实验对照组相比,细胞百分比和凋亡率均增加(P\u003c0.01)。意义;(3)实验组Bim,p27和cyclinD1蛋白均高于对照组,但各组Bax蛋白表达无明显差异;(4)实验组细胞凋亡率加入顺铂24小时后,其凋亡率高于空白对照组。在实验对照组(P\u003c0.01)中,后两组之间的凋亡率差异无统计学意义。

结论:Foxo3a基因在体外的过度表达可诱导G1期大鼠卵巢颗粒细胞静止,并通过促进cyclin D1和p27蛋白的表达增强Bim蛋白的表达。可能诱导颗粒细胞凋亡。铂诱导的颗粒细胞凋亡,其对卵泡发育的调节以及对顺铂对卵巢的毒性的预防需要在体内进行进一步研究。

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