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凝胶迁移或电泳迁移率实验

      凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。通常将纯化的蛋白或细胞粗提液和标记的DNA探针一同保温,在非变性的聚丙烯凝胶电涌上,分离复合物和非结合的探针,DNA-复合物比非结合的探针移动慢。常用实验手段有同位素32P法和非同位素法(化学发光法)。标记探针根据研究结合蛋白的不同,可以是双链或是单链。当检测如转录调控因子一类的DNA结合蛋白,可以纯化蛋白,粗蛋白或核细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA片段和寡聚糖核苷酸片段(特异)和其他非相关的片段(非特异性)来确定DNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异性和非特异性片段的存在下,依据复合物的特点和强度来确定特异性结合。


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