体外SUMO修饰实验一

小泛素相关修饰( SUMO )是生物内极为重要的一种蛋白翻译后修饰方式,是一类广泛存在于真核生物中且高度保守的蛋白质家族,它在调节蛋白质间相互作用、定位、转运、转录、细胞

凝胶迁移或电泳迁移率实验四

实验步骤: 5. 洗膜 (9) 加入 6mlLuminol/Enhancer Solution 和 6ml Stable Peroxide Solution, 避光置于锡箔纸包好的烧杯中,摇匀,作为 Substrate Working Solution 。 (10) 将膜从 Substrate Equilibration Buff

凝胶迁移或电泳迁移率实验三

实验步骤: 5. 洗膜 (1) 将封闭液和 4 倍洗涤液置于 37-50 ℃溶解。 (2) 用 20ml 封闭液封闭尼龙膜,温浴 15min ,摇船轻摇。 (3) 20ml 封闭液中加入 66.7ul Stabilized Streptavidin-Horseradish

凝胶迁移或电泳迁移率实验二

实验步骤: 1. 探针的标记 探针为含有与蛋白特异性结合的中心盒,大约 20bp 。 2. 非变性电泳 (1) 制备 4% 非变性胶 (2) 制备样品 (3) 电泳:预跑胶 30-60min , 100V ,上样,跑胶,

蛋白检测十一

蛋白印迹法 六 显色 3. 碱性磷酸酶缓冲液: 100ml 配方如下。 1mol/L Tris-HCL(pH 9.5) 10ml 5mol/L NaCl 2ml 1mol/L MgCl2 0.5ml DDW 87.5ml * 冷藏保存,可保存数月。 4. 显色液 100BCIP 0.1ml 100×NBT 0.1ml * 显色后

蛋白质相互作用的技术平台—酵母双杂交系统的发展和应用

随着对多种重要生物的大规模基因组测序工作的完成,基因工程领域又迎来了一个新的时代---功能基因组时代。它的任务就是对基因组中包含的全部基因的功能加以认识。生物体系的运

蛋白质检测十

蛋白印迹法 六 显色 2. AP 标记二抗 显色液配置 ( 1 ) 100 × 氯化硝基四氮唑蓝( NBT ): 10ml 配方如下: NBT 0.33g 70% 二甲基甲酰胺 10ml *1.5ml 离心管分装后冷冻保存,可保存数月。 (

蛋白质检测九

蛋白印迹法 六 显色 酶和底物反应显色是蛋白印迹法的最后一步,一般常用酶有 HRP 和 AP ,根据成像底物可分为显色底物和发光底物。发光底物可选用 HRP 标记二抗,显色底物可选用

蛋白质检测八

蛋白印迹法 5 实验步骤 (1) 封闭结束后,用 PBS-T 液轻轻清洗膜,去除封闭液。 (2) 用一抗室温孵育 1h 或 4 ℃过夜。 (3) PBS-T 液清洗, 10min ×3 次。 (4) 二抗孵育,室温, 1h 。

蛋白质检测五

蛋白印迹法 四转膜 操作步骤: 1. 准备:切好的 PVDF 膜和滤纸置于甲醇 5min , PVDF 膜置于电转缓冲液浸泡 10min 以上。 2.转一张膜需 6 张 6cm ×9cm 滤纸和 1 张 6cm×9cmPVDF 膜,滤纸和膜的尺

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