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实验专栏丨小鼠胃食管反流的外科手术模型

操作方法
     一、小鼠准备
     1. 使用体重超过20 g或年龄大于6周的小鼠进行手术。

     2. 在手术之前,小鼠自由采食饲料和水,保持在12:12小时的光暗周期。

     3. 用理发推子刮去手术区域。腹腔注射80 mg/kg氯胺酮和甲苯噻嗪12 mg/kg麻醉小鼠。这种剂量使小鼠在几分钟内进入睡眠状态,并为下列外科手术提供足够的麻醉。

     4. 眼用润滑眼膏预防干燥。

     5. 用优碘消毒皮肤。

           

                                                             图1

     (A)小鼠上消化道的解剖(前视图和侧视图);

     (B)胃反流(侧视图);

     (C)混合反流(前视图);

     (D)十二指肠反流(前视图)。

二、胃食管反流模型(图1B)
     1. 从剑突指向肛门方向,上部正中切约2 cm的切口。

     2. 通过中线打开腹腔,移开剑突。

     3. 切除肝和胃之间的结缔组织,结扎并将脾脏和底部之间的血管束分开,使基底释放出来。

     4. 将底部略微向左倾斜,暴露胃食管交界处的左侧。用一对锋利的剪刀在食管远端肌肉上切开5 mm的纵行切口来暴露上皮。

     5. 沿着同一方向切开上皮(切口1,图1B)。在前作三个切口(切口2, 3和4,图1B)用锋利的手术剪切断大多数前胃。如果胃不是空的,请小心地去除胃内容物。

     6. 放置一个8-0聚丙烯缝线(带有锥形点针)通过a点(在食管)和a’ 点(在前胃)与准确的粘膜到粘膜的反对。同样地,将缝线穿过b点和b’点,以及其他的点对。将这些缝线均匀地间隔开3-4 mm。

     7. 用生理盐水冲洗腹腔,清除血液和胃内容物。用丝线缝合腹部皮肤,用金属夹子固定皮肤。

三、混合反流模型(图1C)
     1. 按照步骤2.1到2.4暴露胃食管连接处。

     2. 轻轻地将食管的背侧与食道后面的血管分开。食道和血管之间放一个小棉尖。注意:棉花可以部分地从顶端去掉,以减少其尺寸。这个棉尖有两个用途,可以起到食道保护血管的作用。

     3. 用锋利的手术刀在食管胃交界处和十二指肠邻近的十二指肠近端各做两个5 mm的纵行切口。十二指肠切开,避开血管,放置于肠系膜交界处。

     4. 用8-0 聚丙烯缝线缝合切口。通常在背侧放置3-4个缝线,前侧放置2-3个缝线。

     5. 去掉棉尖。用生理盐水冲洗腹腔,封闭腹壁和皮肤。

四、十二指肠反流模型(图1D)
     1. 按照步骤3.1到3.4生成混合回流。

     2. 小心地抬起胃露出背部。肝叶可能被肝和胃后部的结缔组织所捕获。小心切开结缔组织,适当保护肝脏,暴露食管背侧血管。

     3. 结扎切断血管。结扎胃食管交界处,切断食管。

     4. 在幽门结扎十二指肠,结扎切断系膜,全胃切除。

     5. 用生理盐水冲洗腹腔,关闭腹壁和皮肤。


五、手术后的治疗
     1. 手术后用加热垫维持体温。

     2. 给予抗生素和止痛剂以防止感染和减轻疼痛。注射拜有利(10 mg/kg,腹腔注射,每日1次,3天)以防止感染,和盐酸丁丙诺啡(0.05 mg/kg,皮下注射,每日两天)作为止痛药。手术后不需要禁食,可以提供液体或软性食物。

     3. 评估每日的一般健康状况。
            
                                       图2、小鼠食管上皮组织结构:无反流

     (A)、胃反流

     (B)、混合反流

     (C)、十二指肠反流

     (D)、标尺=50μm。

参考文献:Surgical Models of Gastroesophageal Reflux with Mice. J Vis Exp. 2015; (102): 53012. DOI: 10.3791/53012

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