我要啦免费统计
当前位置 :主页 > 基金课题 > 科研心得 >
知否。知否。细胞划痕应是这样做!

为什么要做细胞划痕实验?


       细胞划痕(修复)法是简捷测定细胞迁移运动与修复能力的方法,类似体外伤口愈合模型,在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上,用微量枪头或其它硬物在细胞生长的中央区域划线,去除中央部分的细胞,然后再继续培养细胞至实验设定的时间,然后取出细胞培养板,观察周边细胞是否生长(修复)至中央划痕区,以此判断细胞的生长迁移能力,实验通常需设定正常对照组和实验组,实验组是加了某种处理因素或药物、外源性基因等的组别,通过不同分组之间的细胞对于划痕区的修复能力,可以判断各组细胞的迁移与修复能力。


细胞划痕(中洪实拍图 勿盗)


实验步骤:


       将所需的材料进行灭菌,包括直尺和marker笔。

       1、先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀的划横线,大约每隔0.5~1cm一道,横穿过孔。每孔至少穿过5条线。


       2、在孔中加入约5×105个细胞,具体数量因细胞种类不同而不同,接种原则为过夜后融合率达到100%。


       3、第二天用枪头比着直尺,尽量垂至于背后的横线划痕,枪头要垂直,不能倾斜(不同孔之间最好使用同一只枪头)。


       4、PBS洗细胞3次,去处划下的细胞,加入无血清培养基。


       5、放入37℃ 5% CO2培养箱,培养。可按0,6,12,24h时间点取样,拍照(具体时间依实验需要而定)。


细胞划痕实验注意事项:


       1、在用PBS缓冲液冲洗时,注意贴壁慢慢加入,以免冲散单层贴壁细胞,影响实验拍照结果。


       2、一般做划痕实验,都是无血清或者低血清(<2%)否则细胞增殖就不能忽略。


       3、按照6孔板背后画线的垂直方向划痕,可以形成若干交叉点,作为固定的检测点,以解决了前后观察时位置不固定的问题。


划痕法测量迁移的不足之处


       适用的细胞范围小,一般只能适用于上皮细胞、纤维样细胞划痕法的不足也很明显,适用的细胞系很窄,一般只能用于上皮,纤维样细胞系。因为:


       (1)这些细胞本身有迁移能力,且较强;


       (2)细胞有极性,方便测量,观察;


       (3)细胞对无血清有较强的忍受力(至少24h),因此很多肿瘤细胞系是不适合做划痕的。





上一篇:1个步骤,免费获取一份科研人定制文献指南!
下一篇:盘它!设计高活性和低脱靶效果sgRNA!
分享到: