免疫荧光技术

   荧光素标记的抗体与标本中的抗原特异性结合后,形成抗原抗体复合物并带有荧光素;再用荧光显微镜检查上述标本,荧光素受光照射激发就会发出荧光,在显微镜下可以清晰地看见荧光所在的细胞,从而能检测某种抗原的存在与否,并可结合定量技术计算含量。

        一、实验原理:直接法是以荧光素标记的抗体直接与标本内的抗原反应,形成抗原—荧光素标记抗体复合物。根据荧光的分布位置及强度,确定相应抗原的存在与否及其所在部位。

       二、实验材料:抗体

        试剂、试剂盒:PBS  伊文氏

        仪器、耗材:显微镜

       三、实验步骤:

       1.  标本经固定后,PBS洗涤3×3 分钟;


       2.  加荧光素标记的抗体,湿盒内37 ℃孵育50 分钟;

       3.  PBS洗涤3×3 分钟;

       4.  0.1 %伊文氏兰复染;


       5.  PBS洗3 次,蒸馏水洗2 次,每次3 分钟,以除去NaCl结晶;


       6.  缓冲甘油封片,镜检。

       四、注意事项:直接法比较简单,特异性也较高,但每种荧光抗体只能检测一种相应的抗原,应用范围较窄,敏感性也较低。

   

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