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细胞中mRNA原位杂交技术

实验原理及技术背景二:

    原位杂交可分为菌落原位杂交和组织原位杂交。菌落原位杂交是将细菌从培养平板转移到硝酸纤维素滤膜上,然后将滤膜上的菌落裂解以释放DNA。将DNA烘干固定于膜上,然后将滤膜上的菌落裂菌以释放出DNA。将DNA烘干固定于膜上与32P标记的探针杂交,放射自显影检测菌落杂交信号,并与平板上的菌落对位。组织原位杂交简称原位杂交,指组织或细胞的原位杂交,它与菌落的原位杂交不同。菌落原位杂交需要裂解细菌释放DNA,然后进行杂交。而原位杂交是经适当处理后,使细胞通透性增加,让探针进入细胞内与DNARNA杂交。

    原位杂交技术的基本方法包括:1杂交前准备,包括取材、固定、玻片和组织的处理、如何增强核酸探针的穿透性、减低背景染色等。2杂交。3杂交后处理。4显示,包括放射自显影和非放射性标记的组织化学或免疫组织化学显色。 

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