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细胞中mRNA原位杂交技术二

实验原理及技术背景1

    原位杂交组化(ISHH)属于分子杂交的一种,是一种应用标记探针与组织细胞中的待测核酸杂交,再应用标记物的检测系统,在核酸原有的位置将其显示出来的一种检测技术。原位杂交的本质就是在一定的温度和离子浓度下,使其有特异序列的单链探针通过碱基互补配对规则与组织细胞内待测的核酸复性结合而使得组织细胞中的特异性核酸得到定位,并通过探针上所标记的检测系统将其在核酸的原有位置上显示出来。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补,所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序(某种程度的同源性)就可以形成杂交双链。探针的种类按所带标记物可分为同位素标记探针和非同位素标记探针两大类。目前,大多数放射性标记发是通过酶促反应将标记的核苷酸掺入DNA中,常用的同位术标记物有3H35S125I32P。同位素标记物虽然有灵敏性高、背景较为清晰等优点,但是由于反射性核素对人和环境均会造成伤害,近年来有被非同位素取代的趋势。非同位素标记物中目前最常用的有生物素、地高辛和荧光素三种。

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