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细胞中mRNA原位杂交技术三

实验步骤:

二.杂交与显色

1、将加入探针的杂交液先于50℃预热,均匀涂于切片表面,加上硅化盖玻片,放于湿盒中,50℃孵育12-16h

21×SSC(含50%甲酰胺),50℃洗涤2次,每次10min

32×SSC(含50%甲酰胺),37℃洗涤10min

42×SSC0.5ug/ml RNaseA),37℃洗涤30min

51×SSC50℃洗涤10min

61×PBS(含0.1%Tween20),50℃洗涤2次,每次10min

7、PBT室温洗涤10min

8、封闭液处理1-1.5h

9、加抗体(用封闭剂按1:500比例稀释),均匀地涂于切片表面,放于湿盒中,室温1-2h4℃过夜(抗体1:500稀释于1×封闭液)。

10、PBT洗涤3次,每次15min

11、显色缓冲液洗5min

12、滴加显色液,黑暗中显色至适度。可在显微镜下多次观察。

13、显色终止液洗10min,双蒸水洗5次。

14、甲基绿(0.25%)滴加染色几秒中,双真水洗5min

15、脱水封

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