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细胞中mRNA原位杂交技术注意事项

注意事项:

1 原位杂交固定的目的是为了保持细胞结构,最大限度地保存细胞内DNARNA的水平,使探针易于进入细胞或组织。DNA较稳定,RNA易被酶解,在RNA定位上,若要使RNA的降解减少到最低限度,取材后应尽快予以冷冻或固定。

2 玻片包括盖片和载玻片用热肥皂水刷洗,自来水清洗干净后,置于清洁液中浸泡24h,清水洗净烘干,95%乙醇中浸泡24h后蒸馏水冲洗、烘干,烘箱温度最好在150℃或以上过夜除去所有RNA酶。盖玻片在有条件时最好用硅化处理,锡箔纸包裹无尘存放。

3 由于在手指皮肤及实验玻璃皿上均可能有RNA酶,为防止其污染影响实验结果,在整个杂交前一日置高温(240℃)烘烤以达到消除RNA酶的目的。要破坏RNA酶,其最低温度必须在150℃左右。

4 整个实验过程中,切勿切片干燥,否则会严重影响实验结果。

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