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细胞中mRNA原位杂交技术(四)

附表1:部分试剂配制

1 0.1mol/L三乙醇胺-0.25%乙酸酐:三乙醇胺13.2ml,氯化钠5g,浓盐酸4mlDEPC水定容至约1000ml,临用前,一边摇动溶液一边加入乙酸酐2.5ml,充分混合。

2 10×PBS:氯化钠 80gNa2HPO4·12H2O2 32.3gNaH2PO4·2H2O2 4.5g。加DEPC900ml,用HCl/NaOHpH7.2,最后定容为1000ml

3 20×SSCpH=7.0):氯化钠175.3g,枸橼酸钠88.2gDEPC水(ddH2O)定容至1L

4 100×DenhardtsFicoll1gPVP1gBSA1gDEPC水定容至50mL

5 预杂交液:2×SSC50%甲酰胺,100ug/ml变性鱼精DNA5×Denhardts

6 杂交液:2×SSC50%甲酰胺,1×Denhardts,250μg/mL酵母tRNA100μg/mL变性鱼精DNA,10mmol/L Tris-HC1 (pH7.5)0.5SDS5%葡聚糖硫酸酯,标记探针。

7 PBT1×PBS0.1Triton×1002mg/mL BSA使用前加入。

8 封闭液:0.1mol/L Tris-HCI pH7.50.15mol/L NaCI0.5%羊血清或2BSA

9 显色缓冲液:100mmol/L Tris-HCI pH9.5100mmol/L NaCI50mmol/L MgCl2

10 显色液:4.5μL/mL NBT3.5μL/mL BCIP,用显色缓冲液配制。

11 显色终止液:0.1mol/L Tris-HCl pH8.010mmol/L EDTA

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