实验目的:  验证hsa-mir-21与靶基因Tropomyosin 1 3’UTR是否发生作用并进一步确定hsa-mir-21与靶基因Tropomyosin 1 3’UTR的作用位点。

实验材料 

1. 质粒与细胞株

 pMIR-对照质粒（和元生物）；pMIR-TPM1-WT野生型3‘UTR实验质粒（和元生物）；pMIR-TPM1-MUT突变型3‘UTR实验质粒（和元生物）； pRL-CMV（E2261， Promega）；293T细胞株来源于ATCC，细胞培养条件为DMEM+10% FBS+5% CO2。  

2. 实验试剂

 lipofectamine 2000（11668-019, invitrogen）; 胎牛血清(FBS)（SV30087.02，Hyclone）； DMEM（12800-017，GIBCO）； 胰酶（Trypsin-EDTA）（11668-500，Invitrogen）； 24孔板（3524，Corning）; miR-X mimics（和元生物）；Dual-Luciferase Reporter Assay System（E1910， Promega）； Opti-MEM（31985-062, invitrogen）。  

3. 仪器设备

  荧光显微镜（IX71，奥林帕斯）；CO2培养箱（3111，Thermo）；生物安全柜（BSC -Ⅱ-A2，上海净化）； 低速离心机（TDZ4-WS，上海湘仪）； 血球计数板 （REICHERT， Bright-Line）；  水浴锅（HWS12，上海一恒）；酶标仪（Infinite M1000，TECAN）  

4. 统计学处理  GraphPad Prism（Ver5，GraphPad Software） 作图，并进行双侧t检验。

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