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分子提取方法15


蛋白提取

贴壁细胞总蛋白提取

1、培养于35mm培养皿的细胞融合至80%左右。

2、细胞培养皿置于冰上,吸去培养液。

3、加入2ml预冷PBS液,洗涤细胞2-3次。

*应在冰上操作,最后尽可能吸干残留的PBS液。

4、加入100ul预冷蛋白裂解液,用细胞刮刀沿培养皿壁刮细胞。

5、1ml移液器枪头吸刮好的细胞裂解液,放入1.5ml离心管中。

6、冰上孵育15min

7、超生破碎。

8、4℃,15000rpm10min

9、取上清液,转移至新的1.5ml离心管中。

10、取少量样本进行蛋白定量,分装-80℃保存。


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