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微卫星不稳定性的检测五

举例:

大肠癌微卫星不稳定性

2.MI检测:选用了D2S119D13S160D8S282D3S1293D2S123D18S586个微卫星位点进行检测,PCR反应体系为50 mmol/L KCl,10 mmol/L Tris-Cl, 0.1%Trito X-100, 1.5 mmol/L MgCl2,200 μmol/L dNTPS,模板DNA200 ng,上下游引物各50 pmolTaq1U,加去离子水至50 μlPCR反应参数为:94℃变性5分钟,然后进入循环(9445秒,退火温度30秒,721分钟),共35个循环,最后70℃延伸10分钟,4℃保存。PCR产物用8%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,电泳结束后进行银染。

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