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原代培养注意事项

      (1)原代培养材料的选择,尽量选取繁殖能力较强的组织,如胚胎、幼小的生物体或者肿瘤组织等。

      (2)要注意无菌操作。其操作要求应高于外科手术、

      (3)整个取材操作要迅速,尤其孕鼠浸泡乙醇时间1min左右,不能过长,以确保胚胎细胞活性。

      (4)运用消化法时胰酶温度应低于37℃,浓度只需平时消化细胞浓度的一半。因为此过程不像消化培养细胞时的1~10min,而是至少20min,先消化下来的细胞在此胰酶消化液中继续消化了10min以上。所以胰酶不能作用过强,否则这些细胞易被损伤而不易生存。

      (5)如使用组织块法,则应待组织块略干燥,能黏附于瓶壁时再使之与培养液接触,匆使组织块漂浮起来。如果组织块没有黏壁,则细胞不易生长,即使生长也因没有贴在瓶壁上,从而因不能观察到而无法收集到生长的细胞。

      (6)原代培养操作时,也可以使用未添加血清的DMEMPBS洗涤子宫、胚胎或组织块等。

      (7)本实验也可以使用新生乳鼠做培养材料。此时要将乳鼠浸入75%乙醇2~3min使皮肤充分消毒,由于乳鼠原代培养污染概率更高,故应小心操作,避免污染细菌。乳鼠原代培养细胞的存活率不及胚胎细胞培养的成功率。


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