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ChIP染色质免疫沉淀技术

ChIP 技术的应用 染色质免疫沉淀技术还可用于分析两种蛋白共同结合的 DNA 序列,即 ChIP reChIP 方法。 ChIP reChIP 是在第一次 ChIP 的基础上不解交联,而继续进行另一个目的蛋白的免疫沉淀

ChIP染色质免疫沉淀技术

ChIP 技术的应用 染色质免疫沉淀的 DNA 适用于多种分析方法。如果目的蛋白的靶序列是已知的或需要验证的,可采用狭缝杂交 (Slot blot) 的方法,把靶序列特异性探针与染色质免疫沉淀的

ChIP染色质免疫沉淀技术

染色质免疫沉淀中的对照与抗体选择 交联反应的逆转和 DNA 的纯化: 用不含 DNase 的 RNase 和 Proteinase K , 65oC 保温 6 小时逆转交联,经 DNA 纯化柱回收 DNA 或用酚氯仿抽提、乙醇沉淀纯化

ChIP染色质免疫沉淀技术

染色质免疫沉淀中的对照与抗体选择 抗体选择: 染色质免疫沉淀所选择的目的蛋白的抗体是 ChIP 实验成功的关键。因为在蛋白质与染色质交联结合时,抗体的抗原表位可能因为与结合

ChIP染色质免疫沉淀技术​

Input 对照: 在进行免疫沉淀前,需要取一部分断裂后的染色质做 Input 对照。 Input 是断裂后的基因组 DNA ,需要与沉淀后的样品 DNA 一起经过逆转交联, DNA 纯化,以及最后的 PCR 或其他

ChIP染色质免疫沉淀技术

2. 染色质断裂 交联后的染色质可被超声波或 Micrococcal Nuclease 切成 400~600 bp 的片段 ( 用琼脂糖凝胶电泳检测 ) ,以便暴露目标蛋白,利于抗体识别。超声波是使用机械力断裂染色质,容

ChIP染色质免疫沉淀技术

1. 细胞固定 甲醛能有效的使蛋白质 - 蛋白质,蛋白质 -DNA ,蛋白质 -RNA 交联,形成生物复合体,防止细胞内组分的重新分布。甲醛的交联反应是完全可逆的,便于在后续步骤中对 DNA 和

ChIP染色质免疫沉淀技术

chip 技术的原理 染色质免疫沉淀技术的原理是:在生理状态下把细胞内的 DNA 与蛋白质交联在一起,通过超声或酶处理将染色质切为小片段后,利用抗原抗体的特异性识别反应,将与目

ChIP染色质免疫沉淀技

背景: 染色质免疫沉淀技术 (Chromatin Immunoprecipitation ,简称 ChIP) 是研究体内蛋白质与 DNA 相互作用的一种技术。它利用抗原抗体反应的特异性,可以真实地反映体内蛋白因子与基因组

免疫共沉淀四

RIPA Buffer 配置 1. 基础成分 (1) Tris-HCl (防止蛋白变性的缓冲液成分) (2) NaCl (防止非特异性蛋白聚集的盐分) (3) NP-40 (用 H2O 配置成 10% 储存液。 NP-40 为非离子去污剂,用于

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