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蛋白质检测(七)

蛋白印迹法 五 抗原 - 抗体反应 4 二抗的处理 (1) 常用二抗: HRP 偶联二抗。也可用碱性磷酸酶标记二抗,但不够灵敏。 (2) 二抗稀释液: PBS/PBS-T 液、 TBS/TBS-T 液、一般的封闭液等

蛋白质检测(六)

蛋白印迹法 五 抗原 - 抗体反应 1 仪器和设备 塑料盒、振荡器。 2 封闭 一般采用 5% 脱脂奶粉进行封闭,室温, 30-60min 。 * 封闭液的浓度可以是( 1%-5% ),根据自己的条件摸索浓度就可

蛋白质检测(五)

蛋白印迹法 四转膜 操作步骤: 1 准备:切好的 PVDF 膜和滤纸置于甲醇 5min , PVDF 膜置于电转缓冲液浸泡 10min 以上。 * 转一张膜需 6 张 6cm ×9cm 滤纸和 1 张 6cm×9cmPVDF 膜,滤纸和膜的尺寸

蛋白质检测(四)

蛋白印迹法 三 电泳 * 考马斯亮蓝法:用 40% 双蒸水 /10% 醋酸 /50% 甲醇的溶液固定胶中蛋白 考马斯亮蓝 R-250 染色室温染色 4h 过夜,保持摇匀 转入 67.5% 双蒸水 /7.5% 醋酸 /25% 甲醇摇匀脱色

蛋白质检测三

蛋白印迹法 三 电泳 电泳条件:电压 200V ,电流 8mA ,染料进入分离胶时电流增加到 16mA ,时间一般 2-3 小时。 * 溴酚蓝刚跑出胶即可终止电泳进行转膜,也可以根据时间经验停止电泳。

蛋白质检测一

蛋白印迹法 蛋白印迹( Western blot, WB )是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种试验方法,是将蛋白质通过 SDS-PAGE 电泳后,再转移到杂交膜上,然后通过抗原抗体复合物对

蛋白质检测二

蛋白印迹法 二 样品处理及上样 1、 取 15-20ug 蛋白,加 2 倍 SDS 上样缓冲液 7ul , DDW 定容至总体积 14ul 。 * 上样总体积一般少于 15ul ,加样孔的最大限度可加 20ul 样品。 2 、 95 ℃孵育

分子提取方法

ChIP 技术的应用 染色质免疫沉淀的 DNA 适用于多种分析方法。如果目的蛋白的靶序列是已知的或需要验证的,可采用狭缝杂交 (Slot blot) 的方法,把靶序列特异性探针与染色质免疫沉淀的

ChIP染色质免疫沉淀技术

ChIP 技术的应用 染色质免疫沉淀技术还可用于分析两种蛋白共同结合的 DNA 序列,即 ChIP reChIP 方法。 ChIP reChIP 是在第一次 ChIP 的基础上不解交联,而继续进行另一个目的蛋白的免疫沉淀

ChIP染色质免疫沉淀技术

染色质免疫沉淀中的对照与抗体选择 交联反应的逆转和 DNA 的纯化: 用不含 DNase 的 RNase 和 Proteinase K , 65oC 保温 6 小时逆转交联,经 DNA 纯化柱回收 DNA 或用酚氯仿抽提、乙醇沉淀纯化

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