白细胞介素8（IL- 8）检测实验
发布人：管理员 浏览次数： 发布时间：2018-05-14
实验方法原理
采用两株识别不同表位的抗IL-8单克隆抗体，其中一株（4D7）作为包被抗体，以识别和结合待检标本中的IL-8，另一株作为酶标抗体，与结合于包被抗体的IL-8的另一个表位结合并催化底物显色。
实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
1. 包被
pH9.5 碳酸盐缓液稀释4D7单克隆抗体粗提γ球蛋白至1 μg/ml，加入96孔板，100 μl/孔，放4 ℃，36 小时。
2. 封闭
0.1 ％吐温PBS（Buffer A）冲洗96孔板三次，加3 ％BSA Buffer A（Buffer B）200 μl/孔，放37 ℃，1 小时。
3. 加待检样品
Buffer A 冲洗96孔板三次，加待检样品及Buffer B 稀释的标准品100 μl/孔，放37 ℃，3 小时。
4. 加酶标抗体
Buffer A冲洗96孔板五次，3 ％PEG Buffer A稀释酶标抗体至1∶800，加入96孔板，100 μl/孔，放37 ℃，1 小时。
5. 显色
Buffer A冲洗96孔板五次，pH5.4柠檬酸缓冲液溶解底物（ABTS)），0.2 mg/ml，加3 ％H2O2，2 μl/ml，加入96孔板，100 μ/孔，室温下或37 ℃显色。
1. 待检标本如为血清，应采用一次性容器，血液采集后尽快（6小时以内）分离血清。
此文转载：丁香通
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