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蛋白质检测三

蛋白印迹法


三 电泳

电泳条件:电压200V,电流8mA,染料进入分离胶时电流增加到16mA,时间一般2-3小时。

*溴酚蓝刚跑出胶即可终止电泳进行转膜,也可以根据时间经验停止电泳。

*电泳后检测蛋白是否迁移正确与平均,可采用铜染色或考马斯亮蓝染色检测,如凝胶中的蛋白需要进行转膜则需要可逆的铜染法,否则采用不可逆考马斯亮蓝法。

*铜染色法:

电泳胶用蒸馏水洗数秒钟 →   加入0.3mol/LCuCl2染色5-10min  → 去离子水洗一次 →    暗室观察蓝色背景下出现的蛋白透明条带  →  胶置于0.1-0.25mol/L Tris/0.25mol/L EDTA(PH 8.0)缓冲液中漂洗脱色两次  →  电转缓冲液中转膜。

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