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CRISPR/Cas9 抗体最新发布
要说近两年生物医药领域最火的两个词,那绝对是 CRISPR/Cas9 和 CAR-T,并且可以预见未来几年它们将继续吸引我们的眼球。2012 年才首次报道 CRISPR/Cas9 可用于基因编辑,到 2015 年开始风靡全球,它的发展速度令世界瞩目。

基因编辑能够对基因进行精确操作,并且以高效率、低成本的优势实现基因定点删除,突变,敲入等。 目前 CRISPR/Cas9 的主要应用领域是基因敲除,在基础研究领域已经展现出强大的优势,但是在临床应用中,由于潜在的脱靶效应,应用仍然受到限制。在基础研究领域中,CRISPR 技术日渐成熟,当然每家公司所使用的具体 protocol 跟质粒载体不尽相同,做出来的稳定细胞株还是有点差异的,编者就不多赘述。还有少数公司比如汉尹公司,也可以利用 CRISPR/Cas9 技术去提高细胞内源基因的表达,效果可以与转染过表达质粒相媲美,避免了外源基因对细胞的影响,优势显而易见。

作为一家成熟的抗体公司,我们也会利用 CRISPR/Cas9 去 knockout 做敲除验证,这对于抗体特异性的判断是用 siRNA 所不能比的。如果研究人员经常利用 CRISPR/Cas9 技术做功能验证的话,针对 Cas9 的抗体显得尤为必要,这里有好奇的人会问道,在 Cas9 基因随便加个标签不就完事了?编者只能严谨地告诉大家,这种做法是不严谨的。插入基因会一定程度上改变 Cas9 的结构,其功能肯定也会随着结构的变化而变化。检测免疫荧光或流式时,如果标签被包埋在 Cas9 蛋白中,还会出现假阴性结果。这里还存在一点,如果标签抗体的特异不是太好的话,针对 Cas9 的检测就等于白做了。如果有完美的 Cas9 特异性抗体可供选择的话,为何不用呢?





虽然 CRISPR/Cas9 已经成为体外基因组编辑的最流行系统,但体内的基因编辑方法仍然受到 Cas9 导入问题的限制。腺相关病毒载体(AAV)因免疫原性低而常用于基因的体内导入。不过,由于 AAV 只能容纳~4.5 kb,化脓链球菌(spCas9)和 gRNA(总共~4.2 kb)要包装到 AAV 载体中还是很有挑战性的。研究人员随后在 Cas9 的同源物中,找到了金黄色葡萄球菌的 Cas9(SaCas9),证明其在哺乳动物细胞中表现出切割活性。并且长度适合插入 AAV 载体中,效率与 SpCas9 相似,适合体内研究。

既然 SaCas9 有应用价值,针对于 SaCas9 的抗体当然必不可少。






                                                                                                                                                                                                                                                                                                         本文

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