ChIP染色质免疫沉淀技术八
chip 技术的原理 染色质免疫沉淀技术的原理是：在生理状态下把细胞内的 DNA 与蛋白质交联在一起，通过超声或酶处理将染色质切为小片段后，利用抗原抗体的特异性识别反应，将与目
ChIP染色质免疫沉淀技术七
1. 细胞固定 甲醛能有效的使蛋白质 - 蛋白质，蛋白质 -DNA ，蛋白质 -RNA 交联，形成生物复合体，防止细胞内组分的重新分布。甲醛的交联反应是完全可逆的，便于在后续步骤中对 DNA 和
ChIP染色质免疫沉淀技术六
染色质免疫沉淀中的对照与抗体选择 Input 对照： 在进行免疫沉淀前，需要取一部分断裂后的染色质做 Input 对照。 Input 是断裂后的基因组 DNA ，需要与沉淀后的样品 DNA 一起经过逆转交
酶联免疫吸附试验
酶联免疫技术是将抗原抗体反应的特异性与酶促反应的专一性和敏感性结合而形成的一种方法。这是一种固相酶免疫检测技术，始创于 1971 年。它既可用于测定抗原，又可用于测定抗体
ChIP染色质免疫沉淀技术五
染色质免疫沉淀中的对照与抗体选择 抗体选择： 染色质免疫沉淀 所选择的目的蛋白的抗体是ChIP实验成功的关键。因为在蛋白质与染色质交联结合时，抗体的抗原表位可 能因为与结合
ChIP染色质免疫沉淀技术四
染色质免疫沉淀中的对照与抗体选择 交联反应的逆转和 DNA 的纯化： 用不含 DNase 的 RNase 和 Proteinase K ， 65oC 保温 6 小时逆转交联，经 DNA 纯化柱回收 DNA 或用酚氯仿抽提、乙醇沉淀纯化
ChIP染色质免疫沉淀技术三
ChIP 技术的应用 染色质免疫沉淀的 DNA 适用于多种分析方法。如果目的蛋白的靶序列是已知的或需要验证的，可采用狭缝杂交 (Slot blot) 的方法，把靶序列特异性探针与染色质免疫沉淀的
ChIP染色质免疫沉淀技术二
ChIP 技术的应用 目前，随着人类基因组测序工作的基本完成，研究目的蛋白和整个基因组的相互作用逐渐成为研究的热点。由于基因组中的信息量非常大，上述常规方法通常无法满足科
分子提取方法
蛋白提取 组织样本总蛋白提取（小鼠肝组织） 1、 颈椎脱臼处死小鼠， 75% 乙醇擦拭皮肤，剪开腹腔，剪切肝脏组织。 2、 平皿中放入 6ml 预冷 0.9%NaCL 。 3、 称取 0.6g 左右肝组织，在平
免疫组化常见问题的处理
当免疫组化染色没有出现预期结果时，应系统地查找原因，而每一次只能排除一种可能的原因。 对照 / 标本无染色 ① 确认是否忽略了应该加的某种试剂，包括一抗、二抗、三抗及底物
