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免疫荧光

1 直接免疫荧光法的操作步骤

标本的处理:

石蜡切片经脱蜡、梯度酒精脱水后,进行抗原修复,然后用0.01M PBST漂洗5min × 3/次;

•  2%BSA10%BSA 37 C湿盒内封闭30min

•  抗体染色:

–  在标本片上滴加适当稀释的荧光标记抗体(1:81:16稀释),放在湿盒中,37°C孵育30min

•  0.0lmol/L PBS(pH 7.4) 漂洗5min × 3/次,不时震荡(洗去多余游离的荧光素标记的抗体)

•  缓冲甘油封片

–  分析纯无荧光的甘油9+ pH 9.20.2M碳酸盐缓冲液1份配制。

•  镜检:在荧光显微镜下观察。

•  优点:方法简便、特异性高,非特异性荧光染色少。

•  缺点:敏感性偏低;而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。若检测多种抗原需制备多种相应的荧光标记抗体。

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