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杉树花粉诱发豚鼠变态反应性结膜炎模型

采用杉树花粉被动免疫方法,建立豚鼠变态反应性结膜炎模型

1.模型制作方法  Hartley系豚鼠,7周龄,雄性。用杉树花粉加氢氧化铝佐剂的匀浆免疫豚鼠,产生的抗血清用Ovary方法测定效价,抗体效价在160倍以上的血清混匀后使用。用同种豚鼠被动免疫,即静脉注射1ml抗血清。注射血清后第10天,用花粉混悬液点眼诱发结膜炎(花粉蛋白含量为0.7mg/L),每只眼点0.05ml。

2.观测指标与分析

(1)睑结膜病变观察:为了定量观察结膜炎的轻重,在花粉抗原点眼的同时静脉注射1%伊文思蓝的生理盐水溶液1ml。点眼后可观察到结膜充血、水肿、结膜下出血,蓝色素渗漏到结膜组织中,出现典型的变态反应性结膜炎。

(2)睑结膜组织中伊文思蓝含量测定:在花粉抗原点眼后30min处死动物,摘除整个结膜,每只眼的结膜用0.5%硫酸钠与丙酮混合液室温下浸泡48h,提取出结膜中的蓝色素。用紫外分光光度计在620nm测定,将吸收度作为结膜炎相对强度指标。实验操作时豚鼠用戊巴比妥钠(500mg/kg)深度麻醉。

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