目的：建立用于牛源样本中牛病毒性腹泻病毒（BVDV）双重RT-PCR检测方法。

方法：选择已发表的BVDV 1型和BVDV 2型包含5'UTR区高保守区域基因作为靶基因，分别设计合成引物，建立双重BVDV RT-PCR方法，并对方法的特异性、敏感性、稳定性等进行方法学评价。同时用建立的RT-PCR方法检测了小牛血清、小牛血清去蛋白提取液、脾多肽注射液等41批次牛源性样本和64份牛血浆样本。牛源样本和64份牛临床样本。

结果：建立的BVDV RT-PCR检测方法与牛副流感病毒Ⅲ型（BPIV3）、猪瘟病毒（CSFV）、乙型脑炎病毒（JEV）均无交叉反应；检测BVDV 1型和BVDV 2型DNA模板最低浓度分别为每微升8.87×102拷贝和6.31×102拷贝，BVDV 1型和2型cDNA在-30℃冰箱放置12个月仍可检测出目的条带。应用建立的BVDV RT-PCR方法检测41批次牛源样本和64份牛血浆样本，核酸阳性率分别为14.6%和29.7%。

结论：建立的BVDV RT-PCR检测方法具有快速、特异、敏感及稳定的特点，可用于牛源样本携带BVDV核酸的检测。