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抗原-抗体反应

二抗的处理 (1)常用二抗:HRP偶联二抗。也可用碱性磷酸酶标记二抗,但不够灵敏。 (2)二抗稀释液:PBS/PBS-T液、TBS/TBS-T液、一般的封闭液等。 (3)二抗稀释倍数:根据二抗说明书

显色

酶和底物反应显色是蛋白印迹法的最后一步,一般常用酶有HRP和AP,根据成像底物可分为显色底物和发光底物。发光底物可选用HRP标记二抗,显色底物可选用HRP标记二抗或AP标记二抗。显色分为

制备抗肽抗体实验

制备抗肽抗体实验 先将10mgBSA溶于0.5ml0.1mol/lpH6.8的磷酸钠缓冲液当中,放在一个2ml的玻璃试管中,加50μlMBS/DMF溶液,并在室温下温和搅拌30min的时间。加样到PD-10柱子上,上柱前用10ml的0.1mo

蛋白提取

组织样本总蛋白提取(小鼠肝组织) 1、颈椎脱臼处死小鼠,75%乙醇擦拭皮肤,剪开腹腔,剪切肝脏组织。 2、平皿中放入6ml预冷0.9%NaCL。 3、称取0.6g左右肝组织,在平皿中剪碎组织,并转

蛋白质保存套路,你知多少?

蛋白质的的保存方法的选择完全取决于蛋白质的稳定性以及保存后什么时候再次使用你的蛋白。 1、如即提即用的话,可将浓缩蛋白质储存在单一溶液(如PBS),置于聚丙烯管或干净的玻璃

蛋白提取方法

组织样本总蛋白提取(小鼠肝组织) 1、颈椎脱臼处死小鼠,75%乙醇擦拭皮肤,剪开腹腔,剪切肝脏组织。 2、平皿中放入6ml预冷0.9%NaCL。 3、称取0.6g左右肝组织,在平皿中剪碎组织,并转移到

蛋白互作研究技术

荧光能量共振转移 (FRET)检测活体中生物大分子纳米级距离和纳米级距离变化的有力工具,广泛应用于生物大分子相互作用分析、细胞生理研究、免疫分析等。

蛋白质检测三

电泳后检测蛋白是否迁移正确与平均,可采用铜染色或考马斯亮蓝染色检测,如凝胶中的蛋白需要进行转膜则需要可逆的铜染法,否则采用不可逆考马斯亮蓝法。

ChIP染色质免疫沉淀技术(三)

染色质免疫沉淀中的对照与抗体选择 Input 对照: 在进行免疫沉淀前,需要取一部分断裂后的染色质做 Input 对照。 Input 是断裂后的基因组 DNA ,需要与沉淀后的样品 DNA 一起经过逆转交

ChIP染色质免疫沉淀技术(二)

2. 染色质断裂 交联后的染色质可被超声波或 Micrococcal Nuclease 切成 400~600 bp 的片段 ( 用琼脂糖凝胶电泳检测 ) ,以便暴露目标蛋白,利于抗体识别。超声波是使用机械力断裂染色质,容