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免疫共沉淀(二)

蛋白质检测 免疫共沉淀 优点: 1.于天然状态下相互作用的蛋白质。 2.蛋白的相互作用是在自然状态下进行的,可以避免人为的影响。 3.分离得到相互作用蛋白的天然符合物。 缺点:

免疫共沉淀(一)

一、原理: 免疫共沉淀 ( Co-IP )是以研究蛋白质相互作用的经典方法,其原理基础为抗体 - 抗原之间的专一性作用。在分子病理生物学研究领域, Co-IP 是用以确定两种蛋白在完整细胞

体外SUMO修饰实验(五)

5. SUMO化蛋白的检测 (1 )培养细胞,待细胞融合至 90% 左右。 ( 2 ) PBS 洗涤细胞 2 次, 0.25% 胰酶消化细胞。 ( 3 ) 1000rpm ,离心 3-5min 收集细胞。 (4) PBS 洗涤细胞 2 次。 (5) 1

体外SUMO修饰实验(四)

4. 带标签的 SUMO 的制备(以 His-SUMO 为例) (1 )培养细胞、诱导及收获。 ( 2 )每 200ml 菌液收获的菌体加入 5ml His 裂解液,重悬沉淀。 ( 3 )冰浴条件下,超声破碎沉淀。 ( 4 )

体外SUMO修饰实验(三)

3.SUMO质粒瞬时转染 (1)将生长状态良好的细胞接种于直径4-6cm的培养皿中,5% CO2,37℃培养箱内培养16-24h,细胞融合至60%-90%时可进行转染。 (2)转染前1h将细胞培养液换成不含抗生素

体外SUMO修饰实验(二)

2.SUMO质粒DNA的提取 (8)500ul PB缓冲液,13000rpm 离心30-60s,弃掉滤液。 (9)加入750ul的PE缓冲液,13000rpm离心30-60s,弃掉滤液。 (10)13000rpm再次离心1min,甩干残留液体。 (11)将QIApre

体外SUMO修饰实验(一)

1、感受态细胞的制备 (6)7000g,4℃,离心5min收集细胞。 (7)用25ml预冷50mmol/L CaCl2 溶液重悬细胞,冰浴30min。 (8)6000g,4℃,离心5min收集细胞。 (9)用4ml预冷100mmol/L CaCl2 溶液重悬

蛋白质检测三

蛋白印迹法 三 电泳 电泳条件:电压 200V ,电流 8mA ,染料进入分离胶时电流增加到 16mA ,时间一般 2-3 小时。 * 溴酚蓝刚跑出胶即可终止电泳进行转膜,也可以根据时间经验停止电泳。

如何从脂肪组织中提取总蛋白?

从培养的细胞和组织中提取总蛋白是实验室非常常见的实验步骤,从大多数类型的细胞和组织中提取总蛋白比较容易,但是从脂肪组织中提取高质量和高浓度蛋白质是非常困难的。脂肪

蛋白质二维电泳技术原理简介

二维聚丙烯酰胺 凝胶电泳 技术结合了等电聚焦技术(根据蛋白质等电点进行分离)以及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(根据蛋白质的大小进行分离)。这两项技术结合形成的二维电泳