如何从脂肪组织中提取总蛋白？
发布人：管理员 浏览次数： 发布时间：2017-08-30
从培养的细胞和组织中提取总蛋白是实验室非常常见的实验步骤，从大多数类型的细胞和组织中提取总蛋白比较容易，但是从脂肪组织中提取高质量和高浓度蛋白质是非常困难的。脂肪组织有白色和棕色脂肪两种类型，被称为白色脂肪组织（WAT）和棕色脂肪组织（BAT）。脂肪组织中含有许多脂滴，蛋白质含量小于细胞总数的 2%。低蛋白含量使得从脂肪中分离高浓度蛋白极具挑战性。以下是几种从脂肪组织中提取蛋白的方法：
A.RIPA 缓冲液提取法：
脂肪组织通过含有表面活性剂的缓冲液（例如 RIPA 缓冲液）匀浆，离心后，收集脂肪层下的液体组分为蛋白质，这种方法是相对简单的，但是蛋白质的产量非常低，因为表面活性剂经常导致蛋白质形成微小颗粒导致蛋白丢失。
脂肪组织通过含有表面活性剂的缓冲液（例如 RIPA 缓冲液）匀浆，离心后，收集脂肪层下的液体组分为蛋白质，这种方法是相对简单的，但是蛋白质的产量非常低，因为表面活性剂经常导致蛋白质形成微小颗粒导致蛋白丢失。
B. 有机溶剂萃取 TCA 沉淀法：
有以下三种方法：1）脂肪组织通过蔗糖密度梯度离心，丙酮中加入三氯乙酸（TCA）-20℃ 过夜沉淀蛋白。2）脂肪组织用有机溶剂提取液裂解（氯仿和甲醇的混合物），也如上用 TCA 沉淀。3）脂肪组织用有机溶剂提取液（TEF 和氯仿）匀浆，通过离心将水相和氯仿相 分离，将其上的水相和交界面去除，并通过离心蒸发干燥。以上三种方法的共同问题是操作繁琐，产量低。
有以下三种方法：1）脂肪组织通过蔗糖密度梯度离心，丙酮中加入三氯乙酸（TCA）-20℃ 过夜沉淀蛋白。2）脂肪组织用有机溶剂提取液裂解（氯仿和甲醇的混合物），也如上用 TCA 沉淀。3）脂肪组织用有机溶剂提取液（TEF 和氯仿）匀浆，通过离心将水相和氯仿相 分离，将其上的水相和交界面去除，并通过离心蒸发干燥。以上三种方法的共同问题是操作繁琐，产量低。
C. 离心管柱提取法：
这种方法利用了一种新的蛋白质提取技术，脂肪组织通过无表面活性剂的缓冲液匀浆，水油乳状液通过简单的冷冻后，离心使其通过特殊的离心管柱（有孔径，表面性质被处理过的）提取。离心管柱的作用是快速，干净的从油相中分离出水相蛋白。Invent Biotechnologies Inc 公司利用专利技术生产的这种脂肪蛋白提取试剂盒可以从脂肪组织中提取全部的总蛋白，产量远远高于其他方法。
此文转载于：丁香通
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