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体外SUMO修饰实验(三)

  3.SUMO质粒瞬时转染
  (1)将生长状态良好的细胞接种于直径4-6cm的培养皿中,5% CO2,37℃培养箱内培养16-24h,细胞融合至60%-90%时可进行转染。
  (2)转染前1h将细胞培养液换成不含抗生素的培养液。
  (3)用Opti-EME培养液稀释4倍的Lipo2000试剂。
  (4)用Opti-EME培养液稀释SUMO质粒。
  (5)将上两步溶液按1:1比例混合配成转染复合液,室温,孵育20min。
  (6)将已接种细胞的培养皿中加入200ul转染复合液,充分混匀。
  (7)继续培养4-6h,更换正常培养液。

(8)培养24-72h,镜下观察和检测带有荧光标记的SUMO质粒的表达。


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