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免疫共沉淀(一)

一、原理:

免疫共沉淀Co-IP)是以研究蛋白质相互作用的经典方法,其原理基础为抗体-抗原之间的专一性作用。在分子病理生物学研究领域,Co-IP是用以确定两种蛋白在完整细胞内生理性相互作用的常用方法。其技术原理为:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来,如果用蛋白质N的抗体免疫沉淀N,那么与N在体内结合的蛋白质M也能沉淀下来。目前多用于精制的蛋白A预先结合固化在琼脂糖的珠子(Beads)上,使之与含有抗原的溶液及抗体反应后,beads上的蛋白A就能吸附抗原到精制的目的。Co-IP主要用于测定两种目标蛋白质在体内的结合情况,也用于确定一种特定蛋白质的新的结合蛋白。


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