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蛋白互作研究技术


荧光能量共振转移 (FRET)

检测活体中生物大分子纳米级距离和纳米级距离变化的有力工具,广泛应用于生物大分子相互作用分析、细胞生理研究、免疫分析等。
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原理

当供体荧光分子的发射光谱与受体荧光分子的吸收光谱重叠,并且两个分子的距离在 10nm 范围以内时,就会发生一种非放射性的能量转移,即 FRET 现象,使得供体的荧光强度比它单独存在时要低的多(荧光猝灭),而受体发射的荧光却大大增强(敏化荧光)。

应用

1、生物大分子结构和功能研究:细胞膜受体之间相互作用、细胞内分子之间相互作用、膜蛋白的定位修饰、检测酶活性变化等

2、核酸杂交分析

3、免疫分析:不仅适用于小分子 (如半抗原),而且适用于大分子 (如蛋白质)。

特点

1、实验背影低,但抗原、抗体纯度要求较高;

2、简便的均相检测(不需要洗板),操作简单;

3、实验产物比较稳定,可用于固相分析或利用特殊的荧光显微镜进行单细胞分析,但需要特殊的辅助设备;

4、应用灵活多样检测组合丰富,需要融合蛋白的表达


5、可用于复杂环境下的分析,研究活细胞生理条件下研究蛋白质-蛋白质间相互作用。

6、有效的作为 1.0~10.0nm 距离范围。

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