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【动物造模】-如何建立大鼠疑似泰勒氏病毒荧光定量检测方法?

目的:临床快速准确检测大鼠疑似泰勒样病毒(TLV),特别是利用TaqMan探针荧光定量聚合酶链反应(qPCR)技术检测TLV病毒核酸,建立方法。

方法:以基因合成序列作为质粒标准模板,选择3622-3729nt的特定序列,设计引物-TaqMan探针对,优化反应体系和条件,进行qPCR扩增,建立TLVTaqMan并进行评价探针 qPCR 方法及其灵敏度、稳定性和特异性。

结果:建立的TLVqPCR检测方法与校准曲线线性关系良好,R2值为0.99,灵敏度最低。可检测10份/μL。这是常用的PCR方法;鼠病毒无非特异性反应,重现性好,批内和批间变异系数小于1?

结论:利用TaqMan探针建立了快速检测TLV的荧光定量PCR方法。该方法操作简单,灵敏度高,特异性强。

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