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单层细胞的荧光标记实验流程



实验材料:单层细胞


试剂、试剂盒:PBS多聚甲醛甲醇抗体

仪器、耗材:离心机水浴锅培养箱

实验步骤

  1.  置生长成片的单层细胞于冰上冷却,吸去培养液并以4℃PBS洗涤。吸去PBS。
 
  2.  如欲研究细胞表面抗原,则以2%PFA于冰上面定30 min。如为细胞质抗原,则可用含0.1% Triton X-100的2%PFA于冰上固定30 min,或以100%甲醇在普通冰箱的结冻室(-10~-20℃)固定15 min。
 
  3.  吸去固定液,用4℃PBS洗2次(毎次5 min)。稀释的笫一抗体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min。
 
  4.  加第一抗体于培养皿中,使其恰好覆盖细胞,4℃温育1 h,然后用4℃PBS洗4次(每次5 min)。
 
  5.  稀释的笫二抗体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min。
 
  6.  加第二抗体于细胞上,4℃温育4 h。然后用4℃PBS洗4次。
 
  7.  若不想立即观察细胞,则将细胞于PBS中存放。盖好培养皿,以铝箔包裹,冷藏,在24 h 内观察此实验结果是很重要的,因荧光会迅速减弱或与细胞解离。



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