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动物组织培养准备技术之清洗与灭菌(3)

【注意事项】

  (1)干热灭菌时,应在白天使用干烤箱,并不断观察,避免发生意外。当温度超过100℃时,不能再打于烤箱门。器皿烤完后,待温度降至100℃之下才能开烤箱门取出灭菌物品。金属器械、橡胶、塑料制品和一些高温后变性的物品,均不能使用干热消毒方法。

  (2)高压灭菌后器皿务必烧烤或晾干,以防包布或纸潮湿而发霉。此外,落在潮湿包装纸表面的细菌仍有机会通过渗入的水进入已灭菌的瓶内。

  (3)牛血清、大部分培养基、胰酶和一些生物制剂是有机溶液,均不能使用温热灭菌法,否则其中的蛋白质将发生变性。而一些加热分解的物质,如TdR、秋水仙素、谷氨酰胺、异硫氰酸胍、MOPS等,也不能进行湿热灭菌。

  (4)滤过灭菌时,滤器在使用前先装好滤膜(有时可在上面加一层定性滤纸),包好,经高压后才能使用。滤过酶类制剂时,应待过滤器降至室温时,才能进行。使用滤过除菌时,过滤泵调节的压力不宜过大。压力太大时,微孔滤膜有可能破裂,或者使某些微生物在较大压力下产生变形而通过滤膜。过滤器中的滤膜放置的位置一定要准确,防止边缘留有缝隙,使过滤液直接通过。另外滤器包装时,螺钉不要拧得太紧,以免高压蒸汽不能进入,待高压灭菌之后再拧紧使用。

  (5)使用化学消毒法时,应用卫生级配制75%乙醇。而不能用化学纯、分析纯和优级乙醇。来苏儿水不能用于皮肤消毒,因为它对皮肤有刺激性。空气消毒时,所有的物品要事先准备齐全,并使用消毒者有较方便的迅速退出的路径。因为一旦甲醛或乳酸被加热后,放出的蒸汽对人的角膜和呼吸道上皮有严重的刺激和伤害作用。

  (6)与RNA操作有关的器皿消毒时间应更长,这不仅仅是为了灭菌,更为了来活RNA酶,防止在随后的操作中RNA被残留的RNA酶降解。如普通玻璃器皿干热灭菌条件是160℃2h,而提取RNA的玻璃用品需180℃,至少4h。

  (7)使用乙醇消毒时注意应用75%乙醇,无水乙醇或95%乙醇不能达到消毒效果。



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