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原代细胞冻存实验操作步骤

1、选用生长情况好,数量较多的原代细胞,冻存前一天换液一次。

2、贴壁细胞需用0.25%胰酶常规消化将细胞消化下来,将细胞悬液收集至离心管中。

3、1000rpm离心5分钟,弃上清液。

4、沉淀加含DMSO的培养液,计数,调整至(1-10)×106 /ml。

5、将悬液分至冻存管中,每管1 ml。

6、密封冻存管,封口一定要严,否则复苏时易出现爆裂。

7、用记号笔标明细胞种类,冻存日期。

8、按下列顺序降温:室温→4℃(20分钟〕→冰箱冷冻室(30分钟)→超低温冰箱(-80℃过夜)→液氮。

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