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细胞培养注意


 

       a.实验进行前,先摆好操作台,开启操作台及无菌室紫外灯灭菌30-60min;

       b.灭菌后关闭无菌室、操作台紫外,并开启日光灯15-20min后打开操作台和无菌室加装滤网的通风系统5-10min以降低臭氧浓度(减少对操作人员的伤害),开始实验。

       c. 实验人员必须穿好实验服,戴好口罩及手套后方可进入实验室。这一方面可以减少无菌室的污染,一方面可以保护实验员的安全。对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作,并选择适当等级之无菌操作台,并且操作期间切不可弄伤手部及接触感染源的皮肤。

      d.实验操作前用75%酒精擦拭工作区域,并应在抬面之中央无菌区域,勿在边缘之非无菌区域操作,在酒精灯附近操作。

      e.实验时避免经过培养皿或试剂瓶上空,小心取用无菌之实验物品,避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口。

      g.为防止交叉污染,细胞培养液(DMEM、RPMI-1640等)应分装标记使用。一种细胞使用对应瓶分装的培养基。

      h.培养基使用前调整温度至37℃。

      i.Trypsin、FBS、NBS应分装使用,避免反复冻融。

      j.经常检查细胞培养箱内的CO2的浓度、温度、湿度等,查看CO2 钢瓶的内外压力表,定期检查操作台及无菌室的通风过滤系统、紫外杀菌灯等,并注意维护,定期更换。

 

附:

紫外线杀菌器:

 

一:紫外线杀菌器杀菌原理

 

是利用紫外线灯管辐照强度,即紫外线杀菌灯所发出之辐照强度,与被照消毒物的距离成反比。当辐照强度一定时,被照消毒物停留时间愈久,离杀菌灯管愈近,其杀菌效果愈好,反之愈差。

 

 

 

 

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