1、流式细胞仪检测A549细胞凋亡：

      在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。

      AnnexinV是一种分子量为35～36 kD的Ca2＋依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此AnnexinV被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。  

      碘化丙啶（PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将AnnexinV与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

      （1）流式细胞仪上的FL2-W FL2-A FL2-H 分别是做什么的？

      FL2-W是只检测荧光的脉冲宽度， FL2-H是指脉冲高度。通常在做细胞周期分析时应用，用于去除粘连细胞。

      （2）FL1， FL2， FL3 的区别是什么?是指在不同位置测得的荧光?还是不同波长的荧光?这3个参数到底测的是什么?有什么意义?

      你的理解是正确的，其实FL1， FL2， FL3 是指不同的荧光通道.举个例子来说吧.我们用FITC/PE双标记的细胞，在488nm的激光激发下，这两种荧光染料分别发出波长不同的绿色和橙色荧光，然后这发出的荧光再通过滤光片分开，对应的是不同的波长的滤光片，一般在fl1那的是530nm的滤光片，在FL2那的是575nm的滤光片，这样就可以把在一起的荧光分开了。

      （3）怎样用流式细胞仪来鉴定小鼠BMDC？

      检测小鼠BMDC主要是从形态学和细胞表面分子两方面来鉴定我做的时候就做了普通光镜下形态、电镜（扫描和透射），另外检测了小鼠BMDC表面的共刺激分子如CD86、CD11、CD80。还做了MHC II类分子的检测，还有MHCI类分子的检测，这些分子在DC表面都不是特异存在的，在巨噬细胞、淋巴细胞表面也有表达，所以目前并没有非常特异性的方法检测你的细胞一定就是DC，但是从形态和表面分子的检测结合来看，效果就比较好了.一般在幼稚的DC上述分子表达水平较低，DC成熟过程中，上述分子表达呈上调趋势，你可以在不同的培养时间分别检测。

      （4）流式细胞仪检测细胞周期是否需要鸡红细胞作参照？

      不用，标准微球做完laser alignment（光路校正）就可以了。尽量把微球的各色CV值控制在1.5以内。

      （5）流式细胞检测中怎样把对照和样本的检测结果放在一张图中？

      分析获取数据是分开进行的，不可以混在一起上样。首先通过阴性对照调节基本电压，固定条件后进行样品检测，分别保存结果。利用流式软件的multigraph中的overlap可以将阴性对照和样品结果相应图进行叠加，这只是获取数据后对结果的组合和加工。

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