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直接原位PCR(In situ PCR)

原位PCR是原位杂交细胞定位和PCR的高灵敏度相结合的技术,使得靶基因检测有了极大的改进。此技术是在细胞(爬片、甩片或涂片)或组织(石蜡、冰冻切片)上直接对靶基因片段进行

实时荧光定量PCR3

三.内标对荧光定量PCR的影响 1.实时荧光定量PCR无需内标 实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电

实时荧光定量PCR2

二.内标在传统定量中的意义 1.几种传统定量PCR方法简介〔3〕: 1)内参照法: 在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游

实时荧光定量PCR!!

实时荧光定量P CR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出,由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度

PCR扩增产物的克隆3

实验方法原理 TA克隆 系统由Invitrogen公司(San Diego,CA)发展而来的商业性试剂盒,它用于PCR 产物的克隆 和测序。其原理是利用Taq酶能够在PCR 产物的3’末端加上一个非模板依赖的A,而

PCR扩增产物的克隆

实验方法原理 平头连接是将制备好的平头载体和补平或削平的PCR产物直接进行连接。载体可用EcoR V或Sma I切成平头;PCR产物纯化后,可以在22℃用DNA聚合酶I作用30min(利用该酶所具有的

实时荧光定量PCRrealtime PCR

实验材料细胞样品 试剂、试剂盒RNA提取试剂盒荧光定量PCR MixTRIZOLdNTP氯仿逆转录酶MMLV异丙醇Taq酶DEPC水ddH2OTEMgCl2琼脂糖溴化乙锭MOPS甲醛乙酸钠EDTAEB溴酚兰 仪器、耗材离心管离心机风光光

PCR扩增产物的克隆2

实验材料模板DNA 试剂、试剂盒SauIKlenow片段T4连接酶 仪器、耗材移液器移液器吸头PCR小管DNA扩增仪电泳槽电泳仪台式高速离心机 实验步骤 一、PCR反应 1. 依次混匀下列试剂 (1)H2O:35

PCR扩增产物的克隆

实验方法原理 平头连接是将制备好的平头载体和补平或削平的PCR产物直接进行连接。载体可用EcoR V或Sma I切成平头;PCR产物纯化后,可以在22℃用DNA聚合酶I作用30min(利用该酶所具有的

逆转录 RT-PCR 聚合酶链反应3

1.反转录酶的选择 (1) Money 鼠白血病病毒(MMLV)反转录酶:有强的聚合酶活性,RNA酶H活性相对较弱。最适作用温度为37℃; (2)禽成髓细胞瘤病毒(AMV)反转录酶:有强的聚合酶活

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