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聚合酶链式反应(PCR)4

一、 PCR反应的关键环节 1. 模板核酸的制备。 2. 引物的质量与特异性。 3. 酶的质量。 4. PCR循环条件。 二、 PCR常见问题及对策 1. 假阴性,不出现扩增条带 (1)模板原因 ① 模板中含有

聚合酶链式反应(PCR)3

注意事项 1. 由于PCR反应灵敏度很高,因此要特别主意防止DNA污染的发生。样品间的相互污染可能产生假阳性结果,特别是将PCR技术应用到临床病原菌感染确定中。 2. 如果是公用的、没

聚合酶链式反应(PCR)2

实验材料模板DNA 试剂、试剂盒dNTPTaq DNA聚合酶蒸馏水PCR缓冲液引物氯化镁 仪器、耗材PCR仪移液枪PCR板薄壁管离心管离心管盒 实验步骤 一、标准的PCR反应体系 10×扩增缓冲液 10 ul 4种dN

聚合酶链式反应(PCR)

一、实验目的 1.掌握聚合酶链式反应的原理。 2. 掌握移液枪和PCR仪的基本操作技术。 二、实验原理 PCR技术,即聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是由美国PE Cetus公司的Kary Mull

逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR,rtpcr)

实验方法原理 逆转录 -聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取 组织或细胞 中的,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转

交叉引物恒温扩增技术

核酸扩增是核酸分子诊断的关键技术。根据核酸扩增反应中温度变化要求,可以将核酸扩增技术分为两大类:一类是PCR核酸扩增技术,另一类是核酸恒温扩增技术。 PCR技术是指通过控制

PCR扩增产物的克隆

实验方法原理 平头连接是将制备好的平头载体和补平或削平的PCR产物直接进行连接。载体可用EcoR V或Sma I切成平头;PCR产物纯化后,可以在22℃用DNA聚合酶I作用30min(利用该酶所具有的

实时荧光定量PCRrealtime PCR

实验材料细胞样品 试剂、试剂盒RNA提取试剂盒荧光定量PCR MixTRIZOLdNTP氯仿逆转录酶MMLV异丙醇Taq酶DEPC水ddH2OTEMgCl2琼脂糖溴化乙锭MOPS甲醛乙酸钠EDTAEB溴酚兰 仪器、耗材离心管离心机风光光

巢式PCR

实验方法原理 由于巢式PCR反应有两次PCR扩增,从而降低了扩增多个靶位点的可能性(因为与两套引物都互补的引物很少)增加了检测的敏感性;又有两对PCR引物与检测模板的配对,增加

实时荧光定量PCR!!

实时荧光定量P CR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出,由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度

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