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实时荧光定量PCRrealtime PCR

实验材料细胞样品 试剂、试剂盒RNA提取试剂盒荧光定量PCR MixTRIZOLdNTP氯仿逆转录酶MMLV异丙醇Taq酶DEPC水ddH2OTEMgCl2琼脂糖溴化乙锭MOPS甲醛乙酸钠EDTAEB溴酚兰 仪器、耗材离心管离心机风光光

PCR扩增产物的克隆2

实验材料模板DNA 试剂、试剂盒SauIKlenow片段T4连接酶 仪器、耗材移液器移液器吸头PCR小管DNA扩增仪电泳槽电泳仪台式高速离心机 实验步骤 一、PCR反应 1. 依次混匀下列试剂 (1)H2O:35

PCR扩增产物的克隆

实验方法原理 平头连接是将制备好的平头载体和补平或削平的PCR产物直接进行连接。载体可用EcoR V或Sma I切成平头;PCR产物纯化后,可以在22℃用DNA聚合酶I作用30min(利用该酶所具有的

逆转录 RT-PCR 聚合酶链反应3

1.反转录酶的选择 (1) Money 鼠白血病病毒(MMLV)反转录酶:有强的聚合酶活性,RNA酶H活性相对较弱。最适作用温度为37℃; (2)禽成髓细胞瘤病毒(AMV)反转录酶:有强的聚合酶活

逆转录 RT-PCR 聚合酶链反应2

注意事项 1.在实验过程中要防止RNA的降解,保持RNA的完整性。在总RNA的提取过程中,注意避免mRNA的断裂; 2. 为了防止非特异性扩增,必须设阴性对照; 3.内参的设定:主要为了用

逆转录 RT-PCR 聚合酶链反应1

实验方法原理 逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反

聚合酶链式反应(PCR)4

一、 PCR反应的关键环节 1. 模板核酸的制备。 2. 引物的质量与特异性。 3. 酶的质量。 4. PCR循环条件。 二、 PCR常见问题及对策 1. 假阴性,不出现扩增条带 (1)模板原因 ① 模板中含有

聚合酶链式反应(PCR)3

注意事项 1. 由于PCR反应灵敏度很高,因此要特别主意防止DNA污染的发生。样品间的相互污染可能产生假阳性结果,特别是将PCR技术应用到临床病原菌感染确定中。 2. 如果是公用的、没

聚合酶链式反应(PCR)2

实验材料模板DNA 试剂、试剂盒dNTPTaq DNA聚合酶蒸馏水PCR缓冲液引物氯化镁 仪器、耗材PCR仪移液枪PCR板薄壁管离心管离心管盒 实验步骤 一、标准的PCR反应体系 10×扩增缓冲液 10 ul 4种dN

聚合酶链式反应(PCR)

一、实验目的 1.掌握聚合酶链式反应的原理。 2. 掌握移液枪和PCR仪的基本操作技术。 二、实验原理 PCR技术,即聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是由美国PE Cetus公司的Kary Mull

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