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免疫共沉淀(一)

一、原理: 免疫共沉淀 ( Co-IP )是以研究蛋白质相互作用的经典方法,其原理基础为抗体 - 抗原之间的专一性作用。在分子病理生物学研究领域, Co-IP 是用以确定两种蛋白在完整细胞

体外SUMO修饰实验(五)

5. SUMO化蛋白的检测 (1 )培养细胞,待细胞融合至 90% 左右。 ( 2 ) PBS 洗涤细胞 2 次, 0.25% 胰酶消化细胞。 ( 3 ) 1000rpm ,离心 3-5min 收集细胞。 (4) PBS 洗涤细胞 2 次。 (5) 1

体外SUMO修饰实验(四)

4. 带标签的 SUMO 的制备(以 His-SUMO 为例) (1 )培养细胞、诱导及收获。 ( 2 )每 200ml 菌液收获的菌体加入 5ml His 裂解液,重悬沉淀。 ( 3 )冰浴条件下,超声破碎沉淀。 ( 4 )

体外SUMO修饰实验(三)

3.SUMO质粒瞬时转染 (1)将生长状态良好的细胞接种于直径4-6cm的培养皿中,5% CO2,37℃培养箱内培养16-24h,细胞融合至60%-90%时可进行转染。 (2)转染前1h将细胞培养液换成不含抗生素

体外SUMO修饰实验(二)

2.SUMO质粒DNA的提取 (8)500ul PB缓冲液,13000rpm 离心30-60s,弃掉滤液。 (9)加入750ul的PE缓冲液,13000rpm离心30-60s,弃掉滤液。 (10)13000rpm再次离心1min,甩干残留液体。 (11)将QIApre

体外SUMO修饰实验(一)

1、感受态细胞的制备 (6)7000g,4℃,离心5min收集细胞。 (7)用25ml预冷50mmol/L CaCl2 溶液重悬细胞,冰浴30min。 (8)6000g,4℃,离心5min收集细胞。 (9)用4ml预冷100mmol/L CaCl2 溶液重悬

凝胶迁移或电泳迁移率实验

实验步骤: 1.探针的标记 探针为含有与蛋白特异性结合的中心盒,大约20bp。 2.非变性电泳 (1)制备4%非变性胶 (2)制备样品 (3)电泳:预跑胶30-60min,100V,上样,跑胶,100V,30mi

ChIP染色质免疫沉淀技术

ChIP技术 的应用 染色质免疫沉淀技术还可用于分析两种蛋白共同结合的DNA序列,即ChIP reChIP方法。ChIP reChIP是在第一次ChIP的基础上不解交联,而继续进行另一个目的蛋白的免疫沉淀,从

蛋白质检测三

蛋白印迹法 三 电泳 电泳条件:电压 200V ,电流 8mA ,染料进入分离胶时电流增加到 16mA ,时间一般 2-3 小时。 * 溴酚蓝刚跑出胶即可终止电泳进行转膜,也可以根据时间经验停止电泳。

蛋白提取

组织样本总 蛋白提取 (小鼠肝组织) 1、 颈椎脱臼处死小鼠, 75% 乙醇擦拭皮肤,剪开腹腔,剪切肝脏组织。 2、 平皿中放入 6ml 预冷 0.9%NaCL 。 3、 称取 0.6g 左右肝组织,在平皿中剪碎

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