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ChIP染色质免疫沉淀技术(七)

ChIP 技术的应用 目前,随着人类基因组测序工作的基本完成,研究目的蛋白和整个基因组的相互作用逐渐成为研究的热点。由于基因组中的信息量非常大,上述常规方法通常无法满足科

ChIP染色质免疫沉淀技术(七)

ChIP 技术的应用 目前,随着人类基因组测序工作的基本完成,研究目的蛋白和整个基因组的相互作用逐渐成为研究的热点。由于基因组中的信息量非常大,上述常规方法通常无法满足科

ChIP染色质免疫沉淀技术(六)

ChIP 技术的应用 染色质免疫沉淀的 DNA 适用于多种分析方法。如果目的蛋白的靶序列是已知的或需要验证的,可采用狭缝杂交 (Slot blot) 的方法,把靶序列特异性探针与染色质免疫沉淀的

ChIP染色质免疫沉淀技术(五)

染色质免疫沉淀中的对照与抗体选择 交联反应的逆转和 DNA 的纯化 : 用不含 DNase 的 RNase 和 Proteinase K , 65oC 保温 6 小时逆转交联,经 DNA 纯化柱回收 DNA 或用酚氯仿抽提、乙醇沉淀纯化

ChIP染色质免疫沉淀技术(四)

染色质免疫沉淀中的对照与抗体选择 抗体选择 : 染色质免疫沉淀所选择的目的蛋白的抗体是 ChIP 实验成功的关键。因为在蛋白质与染色质交联结合时,抗体的抗原表位可能因为与结合

ChIP染色质免疫沉淀技术(三)

染色质免疫沉淀中的对照与抗体选择 Input 对照: 在进行免疫沉淀前,需要取一部分断裂后的染色质做 Input 对照。 Input 是断裂后的基因组 DNA ,需要与沉淀后的样品 DNA 一起经过逆转交

ChIP染色质免疫沉淀技术(二)

2. 染色质断裂 交联后的染色质可被超声波或 Micrococcal Nuclease 切成 400~600 bp 的片段 ( 用琼脂糖凝胶电泳检测 ) ,以便暴露目标蛋白,利于抗体识别。超声波是使用机械力断裂染色质,容

ChIP染色质免疫沉淀技术(二)

2. 染色质断裂 交联后的染色质可被超声波或 Micrococcal Nuclease 切成 400~600 bp 的片段 ( 用琼脂糖凝胶电泳检测 ) ,以便暴露目标蛋白,利于抗体识别。超声波是使用机械力断裂染色质,容

ChIP染色质免疫沉淀技术

背景: 染色质免疫沉淀技术 (Chromatin Immunoprecipitation ,简称 ChIP) 是研究体内蛋白质与 DNA 相互作用的一种技术。它利用抗原抗体反应的特异性,可以真实地反映体内蛋白因子与基因组

免疫共沉淀(六)

RIPA Buffer配置 1.基础成分 (1)Tris-HCl(防止蛋白变性的缓冲液成分) (2)NaCl(防止非特异性蛋白聚集的盐分) (3)NP-40(用H2O配置成10%储存液。NP-40为非离子去污剂,用于提取蛋白)

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