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蛋白互作研究技术

荧光能量共振转移 (FRET)检测活体中生物大分子纳米级距离和纳米级距离变化的有力工具,广泛应用于生物大分子相互作用分析、细胞生理研究、免疫分析等。

蛋白质检测三

电泳后检测蛋白是否迁移正确与平均,可采用铜染色或考马斯亮蓝染色检测,如凝胶中的蛋白需要进行转膜则需要可逆的铜染法,否则采用不可逆考马斯亮蓝法。

抗原-抗体反应

二抗的处理 (1) 常用二抗: HRP 偶联二抗。也可用碱性磷酸酶标记二抗,但不够灵敏。 (2) 二抗稀释液: PBS/PBS-T 液、 TBS/TBS-T 液、一般的封闭液等。 (3) 二抗稀释倍数:根据二抗

ChIP染色质免疫沉淀技术(四)

染色质免疫沉淀中的对照与抗体选择 抗体选择 : 染色质免疫沉淀所选择的目的蛋白的抗体是 ChIP 实验成功的关键。因为在蛋白质与染色质交联结合时,抗体的抗原表位可能因为与结合

ChIP染色质免疫沉淀技术(三)

染色质免疫沉淀中的对照与抗体选择 Input 对照: 在进行免疫沉淀前,需要取一部分断裂后的染色质做 Input 对照。 Input 是断裂后的基因组 DNA ,需要与沉淀后的样品 DNA 一起经过逆转交

ChIP染色质免疫沉淀技术(二)

2. 染色质断裂 交联后的染色质可被超声波或 Micrococcal Nuclease 切成 400~600 bp 的片段 ( 用琼脂糖凝胶电泳检测 ) ,以便暴露目标蛋白,利于抗体识别。超声波是使用机械力断裂染色质,容

蛋白质保存套路,你知多少?

蛋白质的保存是一个比较棘手的问题,分子生物学实验室的童鞋们或多或少都会碰到。 有没有遇到过,不同批次纯化的蛋白,采用同样的测试方法,活性却不太一样? 有没有遇到过新

ChIP染色质免疫沉淀技术

背景: 染色质免疫沉淀技术 (Chromatin Immunoprecipitation ,简称 ChIP) 是研究体内蛋白质与 DNA 相互作用的一种技术。它利用抗原抗体反应的特异性,可以真实地反映体内蛋白因子与基因组

蛋白互作研究技术

荧光能量共振转移 (FRET) 检测活体中生物大分子纳米级距离和纳米级距离变化的有力工具,广泛应用于生物大分子相互作用分析、细胞生理研究、免疫分析等。 原理 当供体荧光分子

分子提取方法

蛋白提取 组织样本总蛋白提取(小鼠肝组织) 1、 颈椎脱臼处死小鼠, 75% 乙醇擦拭皮肤,剪开腹腔,剪切肝脏组织。 2、 平皿中放入 6ml 预冷 0.9%NaCL 。 3、 称取 0.6g 左右肝组织,在平

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