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ChIP染色质免疫沉淀技术

背景: 染色质免疫沉淀技术 (Chromatin Immunoprecipitation ,简称 ChIP) 是研究体内蛋白质与 DNA 相互作用的一种技术。它利用抗原抗体反应的特异性,可以真实地反映体内蛋白因子与基因组

蛋白互作研究技术

荧光能量共振转移 (FRET) 检测活体中生物大分子纳米级距离和纳米级距离变化的有力工具,广泛应用于生物大分子相互作用分析、细胞生理研究、免疫分析等。 原理 当供体荧光分子

ChIP染色质免疫沉淀技术(八)

ChIP技术的应用 染色质免疫沉淀技术还可用于分析两种蛋白共同结合的 DNA 序列,即 ChIP reChIP 方法。 ChIP reChIP 是在第一次 ChIP 的基础上不解交联,而继续进行另一个目的蛋白的免疫沉淀

ChIP染色质免疫沉淀技术(七)

ChIP 技术的应用 目前,随着人类基因组测序工作的基本完成,研究目的蛋白和整个基因组的相互作用逐渐成为研究的热点。由于基因组中的信息量非常大,上述常规方法通常无法满足科

ChIP染色质免疫沉淀技术(六)

ChIP 技术的应用 染色质免疫沉淀的 DNA 适用于多种分析方法。如果目的蛋白的靶序列是已知的或需要验证的,可采用狭缝杂交 (Slot blot) 的方法,把靶序列特异性探针与染色质免疫沉淀的

ChIP染色质免疫沉淀技术(五)

染色质免疫沉淀中的对照与抗体选择 交联反应的逆转和 DNA 的纯化 : 用不含 DNase 的 RNase 和 Proteinase K , 65oC 保温 6 小时逆转交联,经 DNA 纯化柱回收 DNA 或用酚氯仿抽提、乙醇沉淀纯化

免疫共沉淀(六)

RIPA Buffer配置 1.基础成分 (1)Tris-HCl(防止蛋白变性的缓冲液成分) (2)NaCl(防止非特异性蛋白聚集的盐分) (3)NP-40(用H2O配置成10%储存液。NP-40为非离子去污剂,用于提取蛋白)

免疫共沉淀(五)

15. 14000rpm 瞬时离心 5s ,去上清,收集琼脂糖珠 - 抗原抗体的 复合物 。 16. 用 800ul 预冷 RIPA buffer 冲洗 3 遍。 17. 用 60ul 2 倍上样缓冲液将琼脂糖珠 - 抗原抗体复合物悬起,轻轻敲打混匀

免疫共沉淀(四)

具体步骤: 8. 4 ℃, 14000g 离心 15min ,将上清转移到一个新的离心管中。 9. 测定蛋白浓度,可选用 Bradford 法做蛋白标准曲线。 10. 蛋白定量,分装, -20 ℃保存,可保存 1 个月。 11. 用

免疫共沉淀(三)

具体步骤: 1. 细胞用预冷的 PBS 液洗涤 2 次,最后洗涤完成后吸干 PBS 液。 2. 加入预冷的 RIPA Buffer ( 1ml/107 个细胞、 6cm 培养皿、 75cm2 培养瓶)。 3. 刮留细胞:用预冷的细胞刮子将细