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蛋白质表达常见问题分析

影响蛋白表达有许多因素,如目的蛋白自身的特点,表达载体、表达菌株的组合,诱导表达的条件,培养基的选择 等,都有可能对蛋白的表达产生影响。针对蛋白表达中的一些常见问题

操作篇:western blot 之发光鉴定

一般使用辣根过氧化物酶 HRP-ECL 发光法或碱性磷酸酶 AP-NBT/BICP 显色法。 1.HRP-ECL 发光法: 将 A、B 发光液按比例稀释混合。膜用去离子水稍加漂洗,滤纸贴角吸干,反贴法覆于 A、B 混

蛋白质表达常见问题分析

影响蛋白表达有许多因素,如目的蛋白自身的特点,表达载体、表达菌株的组合,诱导表达的条件,培养基的选择 等,都有可能对蛋白的表达产生影响。针对蛋白表达中的一些常见问题

蛋白质检测

体外 SUMO 修饰实验 1、 感受态细胞的制备 (1) 准备 LB 培养基: 0.5% 酵母浸提物、 1% 胰蛋白胨、 1%NaCl(PH 7.0), 高压灭菌, 4 ℃保存备用。 (2) 准备 LB 琼脂平板:取新鲜配置的 100-20

蛋白质检测

蛋白印迹( Western blot, WB )是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种试验方法,是将蛋白质通过 SDS-PAGE 电泳后,再转移到杂交膜上,然后通过抗原抗体复合物对特定蛋白质进

分子提取方法

蛋白提取 组织样本总蛋白提取(小鼠肝组织) 1、 颈椎脱臼处死小鼠, 75% 乙醇擦拭皮肤,剪开腹腔,剪切肝脏组织。 2、 平皿中放入 6ml 预冷 0.9%NaCL 。 3、 称取 0.6g 左右肝组织,在平

蛋白印迹法

电泳条件:电压 200V ,电流 8mA ,染料进入分离胶时电流增加到 16mA ,时间一般 2-3 小时。 * 溴酚蓝刚跑出胶即可终止电泳进行转膜,也可以根据时间经验停止电泳。 * 电泳后检测蛋白是

ChIP染色质免疫沉淀技术6

染色质免疫沉淀中的对照与抗体选择 抗体选择: 染色质免疫沉淀所选择的目的蛋白的抗体是 ChIP 实验成功的关键。因为在蛋白质与染色质交联结合时,抗体的抗原表位可能因为与结合

质粒转化

质粒转化 [ 基本原理 ] 将质粒 DNA 导入细菌的过程称为转化( Transformation )。此感受态细菌细胞在 CaCl 2 低渗溶液中膨胀为球状(感受态细菌的制备,见前)。质粒 DNA 与 CaCl 2 形成抗

ChIP染色质免疫沉淀技术4

2. 染色质断裂 交联后的染色质可被超声波或 Micrococcal Nuclease 切成 400~600 bp 的片段 ( 用琼脂糖凝胶电泳检测 ) ,以便暴露目标蛋白,利于抗体识别。超声波是使用机械力断裂染色质,容

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