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双萤光素酶报告基因检测 (miRNA靶基因验证)实验 (四)

4. 实验步骤 实验共分以下 3 个主要步骤: 1. 质粒转染细胞;2. 双报告基因检测; 3. 统计学分析。 2. 双报告基因检测 (1) 质粒共转染 48 小时后,弃去培养基,用 100 μ l 1XPBS 洗 1 遍 (2)

免疫组织化学反应结果的判断标准(六)

二、几个需要注意的问题 从上述情况可以看出 , 免疫组织化学结果的判断标准有待于进一步统一 。 当然在判断结果上 , 除了判断标准 , 还有其他一些需要注意的问题。下面谈谈我们的

蛋白质检测(五)

蛋白印迹法 四转膜 操作步骤: 1 准备:切好的 PVDF 膜和滤纸置于甲醇 5min , PVDF 膜置于电转缓冲液浸泡 10min 以上。 * 转一张膜需 6 张 6cm ×9cm 滤纸和 1 张 6cm×9cmPVDF 膜,滤纸和膜的尺寸

动物细胞转染技术三

1. 将 HeLa 细胞 2 ×10 5 个接种于 35mm 培养皿中,培养基为 10%FBS 的 DMEM , 37 ℃, 5%CO 2 培养箱条件培养。 2. 对 GFP 质粒进行除菌处理和浓度测定,可采用无水乙醇沉淀 GFP 质粒,再用 70%

体外SUMO修饰实验三

3.SUMO 质粒瞬时转染 (1) 将生长状态良好的细胞接种于直径 4-6cm 的培养皿中, 5% CO2 , 37 ℃培养箱内培养 16-24h ,细胞融合至 60%-90% 时可进行转染。 (2) 转染前 1h 将细胞培养液换成

小鼠体内生物分布实验二

二、实验原理 1. 小鼠的抓取固定方法: 小鼠温顺,一般不会咬人,抓取时先用右手抓取鼠尾提起,置于鼠笼或实验台向后拉,在其向前爬行时,用左手拇指和食指抓住小鼠的两耳和颈

分子提取方法四

RNA 提取前须知 1、操作中戴口罩和手套 2、 清洁无尘环境中操作,试验台、移液器要用 75% 乙醇擦拭消毒,也可使用 RNase 抑制剂,操作时避免大声喧哗和频繁走动。 3、 玻璃器皿常规洗

DNA定量测定-Feulgen反应一

实验步骤 1.切片经脱蜡入水。 2. 用 1mol/L HCl 浸洗。 3. 切片放入 60 ℃预热的 1mol/L HCl 内 8min 。 4. 室温下 1mol/L HCl 浸洗。 5. 蒸馏水浸洗 2 次,每次 5min. 6. 加入席夫液,于室温反应 30-60

分子提取方法(三)

总 RNA 的提取 分子生物学研究中要了解目的基因的存在和表达,可通过提取组织或细胞中的总 RNA 检测该基因的信使 RNA 。总 RNA 的构成是比较复杂,包括核内 RNA 和胞质 RNA ,此外 RNas

蛋白质检测(四)

蛋白印迹法 三 电泳 * 考马斯亮蓝法:用 40% 双蒸水 /10% 醋酸 /50% 甲醇的溶液固定胶中蛋白 考马斯亮蓝 R-250 染色室温染色 4h 过夜,保持摇匀 转入 67.5% 双蒸水 /7.5% 醋酸 /25% 甲醇摇匀脱色

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