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体外SUMO修饰实验三

1、 感受态细胞的制备 (6)7000g , 4 ℃,离心 5min 收集细胞。 (7) 用 25ml 预冷 50mmol/L CaCl2 溶液重悬细胞,冰浴 30min 。 (8) 6000g , 4 ℃,离心 5min 收集细胞。 (9) 用 4ml 预冷 100

体外SUMO修饰实验二

1、 感受态细胞的制备 (1) 准备 LB 培养基: 0.5% 酵母浸提物、 1% 胰蛋白胨、 1%NaCl(PH 7.0), 高压灭菌, 4 ℃保存备用。 (2) 准备 LB 琼脂平板:取新鲜配置的 100-200ml 的 LB 培养基,加入

体外SUMO修饰实验一

小泛素相关修饰( SUMO )是生物内极为重要的一种蛋白翻译后修饰方式,是一类广泛存在于真核生物中且高度保守的蛋白质家族,它在调节蛋白质间相互作用、定位、转运、转录、细胞

凝胶迁移或电泳迁移率实验四

实验步骤: 5. 洗膜 (9) 加入 6mlLuminol/Enhancer Solution 和 6ml Stable Peroxide Solution, 避光置于锡箔纸包好的烧杯中,摇匀,作为 Substrate Working Solution 。 (10) 将膜从 Substrate Equilibration Buff

凝胶迁移或电泳迁移率实验三

实验步骤: 5. 洗膜 (1) 将封闭液和 4 倍洗涤液置于 37-50 ℃溶解。 (2) 用 20ml 封闭液封闭尼龙膜,温浴 15min ,摇船轻摇。 (3) 20ml 封闭液中加入 66.7ul Stabilized Streptavidin-Horseradish

凝胶迁移或电泳迁移率实验二

实验步骤: 1. 探针的标记 探针为含有与蛋白特异性结合的中心盒,大约 20bp 。 2. 非变性电泳 (1) 制备 4% 非变性胶 (2) 制备样品 (3) 电泳:预跑胶 30-60min , 100V ,上样,跑胶,

凝胶迁移或电泳迁移率实验

凝胶迁移或电泳迁移率实验( EMSA )是一种研究 DNA 结合蛋白和其相关的 DNA 结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。通常将纯化的蛋白或细胞粗提液和标记的 DNA 探针一同保

蛋白质检测十二

七、蛋白印迹实验常见问题及原因分析 1. 没有带? 原因:样品中抗原含量不足(抗原表达量过低;蛋白降解;上样量不足;样品制备错误);制胶浓度比例不合适;转膜不完全;一抗

蛋白检测十一

蛋白印迹法 六 显色 3. 碱性磷酸酶缓冲液: 100ml 配方如下。 1mol/L Tris-HCL(pH 9.5) 10ml 5mol/L NaCl 2ml 1mol/L MgCl2 0.5ml DDW 87.5ml * 冷藏保存,可保存数月。 4. 显色液 100BCIP 0.1ml 100×NBT 0.1ml * 显色后

蛋白质相互作用的技术平台—酵母双杂交系统的发展和应用

随着对多种重要生物的大规模基因组测序工作的完成,基因工程领域又迎来了一个新的时代---功能基因组时代。它的任务就是对基因组中包含的全部基因的功能加以认识。生物体系的运

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