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ChIP染色质免疫沉淀技术四

2. 染色质断裂 交联后的染色质可被超声波或 Micrococcal Nuclease 切成 400~600 bp 的片段 ( 用琼脂糖凝胶电泳检测 ) ,以便暴露目标蛋白,利于抗体识别。超声波是使用机械力断裂染色质,容

ChIP染色质免疫沉淀技术三

1. 细胞固定 甲醛能有效的使蛋白质 - 蛋白质,蛋白质 -DNA ,蛋白质 -RNA 交联,形成生物复合体,防止细胞内组分的重新分布。甲醛的交联反应是完全可逆的,便于在后续步骤中对 DNA 和

ChIP染色质免疫沉淀技术二

chip 技术的原理 染色质免疫沉淀技术的原理是:在生理状态下把细胞内的 DNA 与蛋白质交联在一起,通过超声或酶处理将染色质切为小片段后,利用抗原抗体的特异性识别反应,将与目

ChIP染色质免疫沉淀技术一

背景: 染色质免疫沉淀技术 (Chromatin Immunoprecipitation ,简称 ChIP) 是研究体内蛋白质与 DNA 相互作用的一种技术。它利用抗原抗体反应的特异性,可以真实地反映体内蛋白因子与基因组

免疫共沉淀六

RIPA Buffer 配置 1. 基础成分 (1) Tris-HCl (防止蛋白变性的缓冲液成分) (2) NaCl (防止非特异性蛋白聚集的盐分) (3) NP-40 (用 H2O 配置成 10% 储存液。 NP-40 为非离子去污剂,用于

免疫共沉淀五

15. 14000rpm 瞬时离心 5s ,去上清,收集琼脂糖珠 - 抗原抗体的复合物。 16. 用 800ul 预冷 RIPA buffer 冲洗 3 遍。 17. 用 60ul 2 倍上样缓冲液将琼脂糖珠 - 抗原抗体复合物悬起,轻轻敲打混匀。

免疫共沉淀四

具体步骤: 8. 4 ℃, 14000g 离心 15min ,将上清转移到一个新的离心管中。 9. 测定蛋白浓度,可选用 Bradford 法做蛋白标准曲线。 10. 蛋白定量,分装, -20 ℃保存,可保存 1 个月。 11. 用

免疫共沉淀三

具体步骤: 1. 细胞用预冷的 PBS 液洗涤 2 次,最后洗涤完成后吸干 PBS 液。 2. 加入预冷的 RIPA Buffer ( 1ml/107 个细胞、 6cm 培养皿、 75cm2 培养瓶)。 3. 刮留细胞:用预冷的细胞刮子将细

免疫共沉淀二

优点: 1.于天然状态下相互作用的蛋白质。 2.蛋白的相互作用是在自然状态下进行的,可以避免人为的影响。 3.分离得到相互作用蛋白的天然符合物。 缺点: 1. 低亲和力和瞬间的蛋白

免疫共沉淀一

一、原理: 免疫共沉淀( Co-IP )是以研究蛋白质相互作用的经典方法,其原理基础为抗体 - 抗原之间的专一性作用。在分子病理生物学研究领域, Co-IP 是用以确定两种蛋白在完整细胞

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