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体外SUMO修饰实验五

5. SUMO化蛋白的检测 (1 )培养细胞,待细胞融合至 90% 左右。 ( 2 ) PBS 洗涤细胞 2 次, 0.25% 胰酶消化细胞。 ( 3 ) 1000rpm ,离心 3-5min 收集细胞。 (4) PBS 洗涤细胞 2 次。 (5) 1

体外SUMO修饰实验四

4. 带标签的 SUMO 的制备(以 His-SUMO 为例) (1 )培养细胞、诱导及收获。 ( 2 )每 200ml 菌液收获的菌体加入 5ml His 裂解液,重悬沉淀。 ( 3 )冰浴条件下,超声破碎沉淀。 ( 4 )

体外SUMO修饰实验三

3.SUMO 质粒瞬时转染 (1) 将生长状态良好的细胞接种于直径 4-6cm 的培养皿中, 5% CO2 , 37 ℃培养箱内培养 16-24h ,细胞融合至 60%-90% 时可进行转染。 (2) 转染前 1h 将细胞培养液换成

体外SUMO修饰实验二

2. SUMO 质粒 DNA 的提取 (1) 用 1.5ml 离心管取少量菌液,离心后弃掉上清液。 (2) 用 250ul P1 溶液重悬菌株,漩涡振荡使菌液重新完全悬浮。 (3) 加入 250ulP2 溶液,轻轻涡旋 4-6 次混

体外SUMO修饰实验一

2. SUMO 基因重组质粒的转化及扩增 (1) 取 10ngSUMO 基因重组质粒,加入 50ulDH α 或 JM109 感受态细胞。 (2) 冰浴 30min 42 ℃水浴,热休克 60-90s 冰浴 5min 。 (3) 在试管中加入 950ul 不含抗

SUMO背景介绍

SUMO 化修饰与一些重要疾病相关联。 SUMO 化能影响淀粉样前体蛋白产生淀粉样β肽 (A β ), 其机制尚不清楚。过表达 SUMO23, 诱导 SUMO 化 蛋白增加可抑制 ʌβ的产生 , 过表达 SUMO232K11R ( 其参

体外SUMO修饰实验三

1、 感受态细胞的制备 (6)7000g , 4 ℃,离心 5min 收集细胞。 (7) 用 25ml 预冷 50mmol/L CaCl2 溶液重悬细胞,冰浴 30min 。 (8) 6000g , 4 ℃,离心 5min 收集细胞。 (9) 用 4ml 预冷 100

体外SUMO修饰实验二

1、 感受态细胞的制备 (1) 准备 LB 培养基: 0.5% 酵母浸提物、 1% 胰蛋白胨、 1%NaCl(PH 7.0), 高压灭菌, 4 ℃保存备用。 (2) 准备 LB 琼脂平板:取新鲜配置的 100-200ml 的 LB 培养基,加入

体外SUMO修饰实验一

小泛素相关修饰( SUMO )是生物内极为重要的一种蛋白翻译后修饰方式,是一类广泛存在于真核生物中且高度保守的蛋白质家族,它在调节蛋白质间相互作用、定位、转运、转录、细胞

凝胶迁移或电泳迁移率实验四

实验步骤: 5. 洗膜 (9) 加入 6mlLuminol/Enhancer Solution 和 6ml Stable Peroxide Solution, 避光置于锡箔纸包好的烧杯中,摇匀,作为 Substrate Working Solution 。 (10) 将膜从 Substrate Equilibration Buff

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