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荧光素酶及其报告基因的应用和检测(三)

三 荧光素酶报告基因 报告基因( report gene )是一种易于检测蛋白质或酶等表达产物的基因,可通过报告基因产物的表达来“报告”目的基因的表达调控。通常把报告基因的编码序列和

荧光素酶及其报告基因的应用和检测

二 荧光素酶 荧光素酶( Luciferase )是生物体内催化荧光素 (luciferin) 或脂肪醛 (firefly aldehyde) 氧化发光的一类酶的总称 , 来自于自然界能够发光的生物。 自然界存在的荧光素酶来自萤火

荧光素酶及其报告基因的应用和检测(一)

一 生物发光 生物发光( bioluminescence ) 是指生物体发光或生物体提取物在实验室中发光的现象。它不依赖于有机体对光的吸收,而是一种特殊类型的化学发光, 化学能转变为光能的效

双萤光素酶报告基因检测 (miRNA靶基因验证)实验 (四)

4. 实验步骤 实验共分以下 3 个主要步骤: 1. 质粒转染细胞;2. 双报告基因检测; 3. 统计学分析。 2. 双报告基因检测 (1) 质粒共转染 48 小时后,弃去培养基,用 100 μ l 1XPBS 洗 1 遍 (2)

双萤光素酶报告基因检测 (miRNA靶基因验证)实验 (三)

4. 实验步骤 实验共分以下 3 个主要步骤: 1.质粒转染细胞;2. 双报告基因检测; 3. 统计学分析。 1. 质粒转染细胞 : (1) 细胞铺板:将细胞按 70% 的汇合度接种到 96 孔板。 (2) 转染:

双萤光素酶报告基因检测 (miRNA靶基因验证)实验 (二)

实验目的 : 验证 hsa-mir-21 与靶基因 Tropomyosin 1 3 ’ UTR 是否发生作用并进一步确定 hsa-mir-21 与靶基因 Tropomyosin 1 3 ’ UTR 的作用位点 。 实验材料 1. 质粒与细胞株 pMIR- 对照质粒(和元生物

双萤光素酶报告基因检测 (miRNA靶基因验证)实验

萤光素酶是理想的报告基因,因为哺乳动物细胞中不含内源性萤光素酶,一旦转录完成立刻就生成功能性的萤光素酶。单报告基因实验往往会受到各种实验条件的影响,而双报告基因则

细胞中mRNA原位杂交技术(七)

附录2 续 探针标记 各种不同类型的探针需要经过恰当的标记,才能在原位杂交中应用。 DNA探针一般采用的标记方法为随机引物标记和缺口平移法。寡核苷酸探针则主要采用3'末端标记

细胞中mRNA原位杂交技术(六)

附 2 :探针的选择与标记(续) 1. DNA 和 RNA 探针 其原理是克隆一段特异的 DNA 或 RNA 片段,装载到相应的质粒中。经过质粒扩增,酶解和纯化等步骤,就可以得到大量的 DNA 和 RNA 片段。

细胞中mRNA原位杂交技术(四)

附表 1 :部分试剂配制 1 0.1mol/L 三乙醇胺 -0.25% 乙酸酐:三乙醇胺 13.2ml ,氯化钠 5g ,浓盐酸 4ml , DEPC 水定容至约 1000ml ,临用前,一边摇动溶液一边加入乙酸酐 2.5ml ,充分混合。 2

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