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双荧光素酶报告基因检测 (miRNA靶基因验证)实验

由于miRNA主要通过作用于靶基因的3’UTR起作用,可以将目的基因3’UTR区域构建至载体中报告基因luciferase的后面, 通过比较过表达或者干扰miRNA后,报告基因表达的改变(监测荧光素酶的活性变

细胞中mRNA原位杂交技术

原位杂交可分为菌落原位杂交和组织原位杂交。菌落原位杂交是将细菌从培养平板转移到硝酸纤维素滤膜上,然后将滤膜上的菌落裂解以释放DNA。将DNA烘干固定于膜上,然后将滤膜上的菌落裂

荧光素酶及其报告基因的应用和检测

二 荧光素酶 荧光素酶( Luciferase )是生物体内催化荧光素 (luciferin) 或脂肪醛 (firefly aldehyde) 氧化发光的一类酶的总称 , 来自于自然界能够发光的生物。 自然界存在的荧光素酶来自萤火

荧光素酶及其报告基因的应用和检测

二 荧光素酶 荧光素酶( Luciferase )是生物体内催化荧光素 (luciferin) 或脂肪醛 (firefly aldehyde) 氧化发光的一类酶的总称 , 来自于自然界能够发光的生物。 自然界存在的荧光素酶来自萤火

细胞中mRNA原位杂交技术(七)

各种不同类型的探针需要经过恰当的标记,才能在原位杂交中应用。DNA探针一般采用的标记方法为随机引物标记和缺口平移法。

双萤光素酶报告基因检测 (miRNA靶基因验证)实验 (四)

4. 实验步骤 实验共分以下 3 个主要步骤: 1. 质粒转染细胞;2. 双报告基因检测; 3. 统计学分析。 2. 双报告基因检测 (1) 质粒共转染 48 小时后,弃去培养基,用 100 μ l 1XPBS 洗 1 遍 (2)

细胞中mRNA原位杂交技术三

实验步骤: 二.杂交与显色 1 、将加入探针的杂交液先于 50 ℃预热,均匀涂于切片表面,加上硅化盖玻片,放于湿盒中, 50 ℃孵育 12-16h 。 2 、 1 ×SSC (含 50% 甲酰胺), 50 ℃洗涤

细胞中mRNA原位杂交技术(四)

附表 1 :部分试剂配制 1 0.1mol/L 三乙醇胺 -0.25% 乙酸酐:三乙醇胺 13.2ml ,氯化钠 5g ,浓盐酸 4ml , DEPC 水定容至约 1000ml ,临用前,一边摇动溶液一边加入乙酸酐 2.5ml ,充分混合。 2

荧光素酶及其报告基因的应用和检测(一)

一 生物发光 生物发光( bioluminescence ) 是指生物体发光或生物体提取物在实验室中发光的现象。它不依赖于有机体对光的吸收,而是一种特殊类型的化学发光, 化学能转变为光能的效

细胞中mRNA原位杂交技术(五)

附表 1 :部分试剂配制 1 0.1mol/L 三乙醇胺 -0.25% 乙酸酐:三乙醇胺 13.2ml ,氯化钠 5g ,浓盐酸 4ml , DEPC 水定容至约 1000ml ,临用前,一边摇动溶液一边加入乙酸酐 2.5ml ,充分混合。 2

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