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siRNA表达载体的构建

要使用这类载体,需要订购2段编码短发夹RNA序列的DNA单链,退火,克隆 到相应载体的pol III 启动子下游。由于涉及到克隆 ,这个过程需要几周甚至数月的时间,同时也需要经过测序以保

RNA干扰(转录后基因沉默)实验

病毒基因、人工转入基因、转座子等外源性基因随机整合到宿主细胞基因组内,并利用宿主细胞进行转录时,常产生一些dsRNA。宿主细胞对这些dsRNA迅即产生反应。其胞质中的核酸内切酶

荧光素酶及其报告基因的应用和检测(四)

三 荧光素酶报告基因 2 报告基因简单实验流程 构建包含有报告基因的质粒 将构建好的质粒转染细胞 提供相应的刺激(诱导) 检测报告基因 数据分析 3 荧光素酶作为报告基因的优势

荧光素酶及其报告基因的应用和检测

二 荧光素酶 荧光素酶( Luciferase )是生物体内催化荧光素 (luciferin) 或脂肪醛 (firefly aldehyde) 氧化发光的一类酶的总称 , 来自于自然界能够发光的生物。 自然界存在的荧光素酶来自萤火

细胞中mRNA原位杂交技术(二)

实验原理及技术背景二: 原位杂交可分为菌落原位杂交和组织原位杂交。菌落原位杂交是将细菌从培养平板转移到硝酸纤维素滤膜上,然后将滤膜上的菌落裂解以释放 DNA 。将 DNA 烘干

细胞中mRNA原位杂交技术(一)

实验原理及技术背景二: 原位杂交可分为菌落原位杂交和组织原位杂交。菌落原位杂交是将细菌从培养平板转移到硝酸纤维素滤膜上,然后将滤膜上的菌落裂解以释放DNA。将DNA烘干固定

荧光素酶及其报告基因的应用和检测(五)

正因为荧光素酶与底物的结合特异性很强,检出的灵敏度高,没有激发光的非特异性干扰,信噪比较高,具有其他报告基因不可替代的优势,它作为报告基因显示出良好的前景。荧光素酶已成为

mRNA的S1作图实验

实验材料 mRNA 试剂、试剂盒 琼脂糖电泳缓冲液 ATP 寡聚核苷酸引物 多核苷酸激酶缓冲液

氢氧化甲基汞琼脂糖凝胶电泳

氢氧化甲基汞和 RNA 中的尿嘧啶和鸟嘌呤上的亚胺键可发生反应,而这些键涉及到 Watson-Crick 碱基配对。因此,氢氧化甲基汞是一种有效的变性剂,能破坏 RNA 的二级结构.在氢氧化甲基汞存在时

总RNA的提取

完整RNA 的提取和纯化,是进行RNA 方面的研究工作,如Nothern杂交、mRNA 分离、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及体外翻译等的前提。所有RNA的提取过程中都有五个关键点,即1):样品细胞或组织

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