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mRNA原位杂交技术四

注意事项: 1 原位杂交固定的目的是为了保持细胞结构,最大限度地保存细胞内DNA或RNA的水平,使探针易于进入细胞或组织。DNA较稳定,RNA易被酶解,在RNA定位上,若要使RNA的降解减少

mRNA原位杂交技术三

实验步骤: 二.杂交与显色 1、将加入探针的杂交液先于50℃预热,均匀涂于切片表面,加上硅化盖玻片,放于湿盒中,50℃孵育12-16h。 2、1×SSC(含50%甲酰胺),50℃洗涤2次,每次10m

细胞中mRNA原位杂交技术(二)

实验原理及技术背景二: 原位杂交可分为菌落原位杂交和组织原位杂交。菌落原位杂交是将细菌从培养平板转移到硝酸纤维素滤膜上,然后将滤膜上的菌落裂解以释放 DNA 。将 DNA 烘干

细胞中mRNA原位杂交技术(一)

实验原理及技术背景二: 原位杂交可分为菌落原位杂交和组织原位杂交。菌落原位杂交是将细菌从培养平板转移到硝酸纤维素滤膜上,然后将滤膜上的菌落裂解以释放DNA。将DNA烘干固定

荧光素酶及其报告基因的应用和检测(六)

中荧光素酶的发光,曝光 10min , binning3x3 四 荧光素酶报告基因的检测方法 依赖生物发光特性 , 利用闪烁计数器 ( scintillationcounter) 对荧光素酶的活性作出定量检测。在标准反应条件下

荧光素酶及其报告基因的应用和检测(五)

3 荧光素酶作为报告基因的优势:  内源性低,哺乳动物无内源性表达  荧光素酶检测不受细胞内其他物质影响  发光检测,检测方便  灵敏度高,10‐20摩尔荧光素酶分子  检测

荧光素酶及其报告基因的应用和检测(四)

三 荧光素酶报告基因 2 报告基因简单实验流程 构建包含有报告基因的质粒 将构建好的质粒转染细胞 提供相应的刺激(诱导) 检测报告基因 数据分析 3 荧光素酶作为报告基因的优势

荧光素酶及其报告基因的应用和检测(三)

三 荧光素酶报告基因 报告基因( report gene )是一种易于检测蛋白质或酶等表达产物的基因,可通过报告基因产物的表达来“报告”目的基因的表达调控。通常把报告基因的编码序列和

荧光素酶及其报告基因的应用和检测

二 荧光素酶 荧光素酶( Luciferase )是生物体内催化荧光素 (luciferin) 或脂肪醛 (firefly aldehyde) 氧化发光的一类酶的总称 , 来自于自然界能够发光的生物。 自然界存在的荧光素酶来自萤火

荧光素酶及其报告基因的应用和检测(一)

一 生物发光 生物发光( bioluminescence ) 是指生物体发光或生物体提取物在实验室中发光的现象。它不依赖于有机体对光的吸收,而是一种特殊类型的化学发光, 化学能转变为光能的效

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