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细胞中mRNA原位杂交技术(四)

附表 1 :部分试剂配制 1 0.1mol/L 三乙醇胺 -0.25% 乙酸酐:三乙醇胺 13.2ml ,氯化钠 5g ,浓盐酸 4ml , DEPC 水定容至约 1000ml ,临用前,一边摇动溶液一边加入乙酸酐 2.5ml ,充分混合。 2

细胞中mRNA原位杂交技术(五)

附 2 :探针的选择与标记 1.探针选择 特异性的探针必须是一段已知的基因片段。相对于膜上杂交而言,原位杂交有特殊性。即细胞和组织中的待测基因隐藏于类似于网络状的立体结构之

细胞中mRNA原位杂交技术注意事项

注意事项: 1 原位杂交固定的目的是为了保持细胞结构,最大限度地保存细胞内 DNA 或 RNA 的水平,使探针易于进入细胞或组织。 DNA 较稳定, RNA 易被酶解,在 RNA 定位上,若要使 RNA 的

细胞中mRNA原位杂交技术三

实验步骤: 二.杂交与显色 1 、将加入探针的杂交液先于 50 ℃预热,均匀涂于切片表面,加上硅化盖玻片,放于湿盒中, 50 ℃孵育 12-16h 。 2 、 1 ×SSC (含 50% 甲酰胺), 50 ℃洗涤

细胞中mRNA原位杂交技术二

实验原理及技术背景 1 : 原位杂交组化( ISHH )属于分子杂交的一种,是一种应用标记探针与组织细胞中的待测核酸杂交,再应用标记物的检测系统,在核酸原有的位置将其显示出来的

细胞中mRNA原位杂交技术

实验原理及技术背景二: 原位杂交可分为菌落原位杂交和组织原位杂交。菌落原位杂交是将细菌从培养平板转移到硝酸纤维素滤膜上,然后将滤膜上的菌落裂解以释放 DNA 。将 DNA 烘干

荧光素酶及其报告基因的应用和检测

四 荧光素酶报告基因的检测方法 依赖生物发光特性 , 利用闪烁计数器 ( scintillationcounter) 对荧光素酶的活性作出定量检测。在标准反应条件下 , 加入超量底物 , 经一定时间内 , 荧光闪烁

荧光素酶及其报告基因的应用和检测

3 荧光素酶作为报告基因的优势: ² 内源性低,哺乳动物无内源性表达 ² 荧光素酶检测不受细胞内其他物质影响 ² 发光检测,检测方便 ² 灵敏度高, 10 ‐ 20 摩尔荧光素酶分子 ² 检测

荧光素酶及其报告基因的应用和检测八

三 荧光素酶报告基因 2 报告基因简单实验流程 l 构建包含有报告基因的质粒 l 将构建好的质粒转染细胞 l 提供相应的刺激(诱导) l 检测报告基因 l 数据分析 3 荧光素酶作为报告基因的

荧光素酶及其报告基因的应用和检测七

三 荧光素酶报告基因 报告基因( report gene )是一种易于检测蛋白质或酶等表达产物的基因,可通过报告基因产物的表达来“报告”目的基因的表达调控。通常把报告基因的编码序列和

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