使用流式细胞仪进行人类单核细胞亚群的全血染色


一、材料与试剂

1.  抗体

 

1)鼠抗人CD56FITCBD,340410

 

2)鼠抗人CD2FITCBD555326

 

3)鼠抗人CD19FITC555412

 

4)鼠抗人CD14PerCPInvitrogen,MHCD1431

 

5)鼠抗人CD16PacBlueBD,558122

 

6)鼠抗人HLA-DRAPC-Cy7BioLegend,307617

 

2.  其他材料

1)带K3EDTA的玻璃全血管(BDVacutainer366450

 

210×BDFACS裂解液(BDPharmigen349202

 

320%甲醛(Tousimis1008A

 

4PBSCalciumandMagnesiumfree,Gibco20012-027

 

55 mL 聚丙烯管(BDFalcon352063

 

二、仪器

1.  BDLSRII流式细胞仪

 

三、步骤

1.  将人血加入到带K3EDTA的玻璃全血管,然后轻摇几次混合血液。

 

2.  将100 ul 全血加入到5 mL 的聚丙烯管,并贴上标签。

 

3.  取各种抗体5 uL 到血样中,轻拍管混合血样。

 

4.  室温,黑暗孵育样品。

 

5.  加入2 ml 1×BDFACS裂解液(10×Solution dilutedin ddH2O

 

6.  混匀样品三次,离心2~3 min

 

7.  室温,1 200 rpm 离心7 min

 

8.  除去上清,用200 ul 2%甲醛重悬沉淀。

 

9.  BDLSRII流式细胞仪检测样品。

 

10.  使用FlowJo分析数据。


此文转载:丁香通

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