质粒转染细胞株基因检测 (miRNA靶基因验证)
发布人:管理员 浏览次数: 发布时间:2018-05-03
4.实验步骤
实验共分以下3个主要步骤:
1. 质粒转染细胞;2.双报告基因检测;3. 统计学分析。
2. 双报告基因检测
(1) 质粒共转染48小时后,弃去培养基,用100μl 1XPBS洗1遍
(2) 倾斜96孔板,吸干剩余的PBS
(3) 去离子水将5XPLB稀释成1XPLB,使用前放到常温
(4) 每孔加50μl稀释好的 1X PLB,摇床常温条件下摇15min,进行裂 解
(5) 白色不透光的96孔酶标板中每孔加步骤4的上清液10μl, 加入100 μl预先混好的LAR II,2s后测数据
(6) 每孔添加100μl预先混好的Stop&Glo Reagent,静止2s后,测数 据 注意:进行Luciferase活性检测时,需在避光条件下进行。
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