第一部分 Total RNA 的提取

 

一、 试剂配制

 

准备工作：

 

1、研钵、5ml/10ml/ 25ml移液管、100ml/250ml量筒、250ml/100ml容量瓶、药匙、 试剂瓶等玻璃制品均用锡纸包裹口部，置于烤箱内,180℃，烤6小时。

 

2、50ml/1.5ml离心管、枪头等塑料制品用0.1‰DEPC水浸泡过夜后，121℃ 20mins 高压灭菌。

 

3、电泳槽及电泳托、梳子用3%双氧水处理。

 

4、常用试剂及其配方：

 

▲DEPC水：在1000ml去离子水中加入100ul DEPC, 静置过夜后高压灭菌。

 

▲0.78M柠檬酸纳：PH=4~5

 

三水合柠檬酸纳    22.94g

 

加DEPC水定容至100ml，室温放置备用。

 

▲10%肌氨酸钠：

 

肌氨酸钠    10g

 

加DEPC水定容至100ml，室温放置备用。

 

▲变性裂解液：   

 

0.78M柠檬酸钠       8.25ml

 

10%肌氨酸钠    12.375ml

 

异硫氰酸胍    118.05g

 

加DEPC水定容至  250ml，室温放置备用

 

临用前加β-巯基乙醇使其终浓度为1%（v/v）

 

▲2M 醋酸钠    PH=4.5

 

NaAc・3H2O    13.6g

 

加DEPC水定容至50ml,高压灭菌，室温放置备用

 

▲3M醋酸钠PH=5

 

NaAc・3H2 O    20.4g

 

加DEPC水定容至50ml,高压灭菌，室温放置备用

 

▲ 4M LiCL:

 

LiCL     24.164g

 

加DEPC水定容至100ml,高压灭菌，室温放置备用

 

▲0.5M EDTA  PH=8.0

 

EDTA    18.61g

 

用NaOH调PH值至8.0，定容到100ml，高压灭菌，室温放置备用  

 

▲10X  MOPS (3-（N-吗啉代）丙磺酸):

 

MOPS    41.86g

 

NaAC・3H2O    4.10g

 

0.5MEDTA（PH 8.0）    20ml

 

用NaOH调PH值 6.5 , DEPC水定容到1L，室温避光放置备用。

 

▲1x  MOPS:

 

10x  MOPS     30ml

 

加DEPC水270ml，用时现配。

 

▲4x RNA  Loading  buffer:

 

10x MOPS   400ul

 

甘油（高压过）   200UL

 

溴酚兰    10ul

 

甲醛(37%)      72ul

 

去离子甲酰氨    310ul

 

EDTA(0.5M  PH 8.0)    8ul

 

ErBr(10mg/ml in DEPCH2O)      70ul

 

在4℃ 可保持3个月

 

▲10x PBS

 

pH=7.4

 

NaCl    80g

 

KCl    2g

 

Na2HPO4   14.4g

 

KH2PO4    2.4g

 

定容至1000ml

 

▲变性电泳胶：

 

称取0.5g琼脂糖，加入47.5ml 1x MOPs，加热至琼脂糖熔化后，冷却至50℃左右，加入2.5ml甲醛，轻轻混匀后倒入电泳托上。

 

▲变性电泳缓冲液：

 

在250ml容量瓶内加入5ml甲醛，用1x MOPS定容至250ml

 来源：丁香通