目的 探究miR-199a在LPS诱导的大鼠原代心肌细胞中的作用。

方法 将大鼠原代心肌细胞分为对照组(NC)、LPS 组、LPS+miR-199a mimic 组、LPS+miR-199a inhibitor 组。 本实验采取 CCK8 方法探究 miR-199a 对于大鼠原代心肌的细胞活力影响。 随后运用 ELISA 法检测 miR-199a 对于 LPS 诱导大鼠原代心肌细胞的炎症因子如 TNF-α 及 IL-1β 的释放情况。 通过流式细胞仪检测 miR-199a 对于 LPS 诱导大鼠原代心肌细胞的凋亡蛋白变化。 运用 Western blot 实验研究 miR-199a 模拟物或抑制剂的 miR-199a 表达情况以及研究 miR-199a 对于 LPS 诱导 大鼠原代心肌细胞的 p-p65、p65 和 p-iκBa、iκBa 及凋亡蛋白表达情况。

结果 CCK8 法发现与 NC 组相比,LPS 抑制了大鼠原代心肌细胞的活力(P<0. 01),然而经模拟物处理后,经 LPS 诱导的大鼠原代心肌活力受抑制更加严重 (P<0. 05)。 同时,与模拟物组相比,miR-199a 抑制剂组大鼠原代心肌细胞活力受抑制降低(P<0. 01)。 ELISA 结果表明,与 NC 组相比,LPS诱导了 TNF-α 及 IL-1β 的释放(P<0. 05)。 与 LPS 组相比,miR-199a 模拟物组加重了 TNF- α(P<0. 01)及 IL-1β(P<0. 05)的释放,而 miR-199a 抑制剂组 TNF-α(P<0. 01)及 IL-1β(P<0. 05)的释放减少。 流式凋亡、Western blot 结果表明,50 nmol / L 的 miR-199a 模拟物可通过上调 caspase3、bax 表达和下调 bcl2 表达而加剧 LPS 引起的大鼠原代心肌细胞的凋亡(P<0. 05)。 进一步检测 NF-κΒ 通路发现 LPS 可通过 p-iκBa 与 p-p65 表达 的上调诱激活大鼠原代心肌细胞 NF-κΒ 通路,但与 LPS 组相比,在模拟物处理后,p-p65 和 p-iκBa 上调更加明显。 与此同时,阻断 miR-199a 后,与模拟物组相比,p-p65 和 p-iκBa 表达下调。 这些发现表明用模拟物处理可以加重体内 LPS 诱导的心肌炎中 NF-κB 信号传导途径的激活。 进一步使用 NF-κB 通路抑制剂发现,miR-199a 模拟物并不 能加剧 LPS 对于大鼠原代心肌细胞的活力抑制,这进一步提示 miR-199a 可能通过 NF-κB 通路加剧心肌细胞的损伤。

结论 miR-199a 可加重心肌细胞的损伤这种损伤主要通过 NF-κB 信号通路来实现的。