1、植物组织蛋白质提取方法
    1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。
    2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。
    3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃
    4、提取上清夜，样品制备完成。
 蛋白质提取液：300ml
    1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml
    2、甘油（Glycerol）75ml
    3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g
 这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！
 
2 、植物组织蛋白质提取方法
 三氯醋酸—丙酮沉淀法
    1、在液氮中研磨叶片
    2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清。
    3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。
    4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。
    5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。
 药品：
    提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮
    裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。
    这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！
 
 3 、 组织：肠黏膜
    目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达
    应用TRIPURE提取蛋白质步骤：
    含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）
    倒转混匀，置室温10min
    离心：12000 g，10min，4度，弃上清
    加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）
    振荡，置室温20min
    离心： 7500g，5 min，4度，弃上清
    重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次
    沉淀中加入100％乙醇 2ml

此文转载于：丁香通

想了解更多相关信息，请关注： http://www.chinazglab.com/
咨询更多实验情况可以联系晏老师，联系电话：15870661478 （微信同号）