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植物组织蛋白质提取方法

1、植物组织蛋白质提取方法
    1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上。
    2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时)。
    3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃
    4、提取上清夜,样品制备完成。
 蛋白质提取液:300ml
    1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml
    2、甘油(Glycerol)75ml
    3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g
 这种方法针对SDS-PAGE,垂直板电泳!
 
2 、植物组织蛋白质提取方法
 三氯醋酸—丙酮沉淀法
    1、在液氮中研磨叶片
    2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜,然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清。
    3、加入等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇),摇匀后离心(4℃8000rpm以上1小时),然后真空干燥沉淀,备用。
    4、上样前加入裂解液,室温放置30分钟,使蛋白充分溶于裂解液中,然后离心(15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准),可临时保存在4℃待用。
    5、用Brandford法定量蛋白,然后可分装放入-80℃备用。
 药品:
    提取液:含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮
    裂解液:2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中(终体积为5ml),使用前再加入1M的DTT65ul/ml。
    这种方法针对双向电泳,杂质少,离子浓度小的特点!当然单向电泳也同样适用,只是电泳的条带会减少!
 
 3 、 组织:肠黏膜
    目的:WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达
    应用TRIPURE提取蛋白质步骤:
    含蛋白质上清液中加入异丙醇:(1.5ml每1mlTRIPURE用量)
    倒转混匀,置室温10min
    离心:12000 g,10min,4度,弃上清
    加入0.3M盐酸胍/95%乙醇:(2ml每1mlTRIPURE用量)
    振荡,置室温20min
    离心: 7500g,5 min,4度,弃上清
    重复0.3M盐酸胍/95%乙醇步2次
    沉淀中加入100%乙醇 2ml

此文转载于:丁香通

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