具体步骤：

  1. 细胞用预冷的PBS液洗涤2次，最后洗涤完成后吸干PBS液。

  2. 加入预冷的RIPA Buffer（1ml/107个细胞、6cm培养皿、75cm2培养瓶）。

  3. 刮留细胞：用预冷的细胞刮子将细胞从培养皿或培养瓶中上刮下，将悬液转入1.5mlEP管中，EP管插冰上，置于水平摇床上缓慢晃动15min。

  4. 4℃，14000g离心15min。

  5. 立即将上清液转移到一个新的离心管中。

  6. 准备Protein A琼脂糖，用PBS液洗两遍珠子，然后用PBS液配制成50%浓度。

  *为避免操作中破坏琼脂糖珠，减掉移液器枪头的尖部分。

  7. 每ml总蛋白中加入100ul Protein A琼脂糖珠（50%），EP管插冰上，置于水平摇床上4℃摇晃10min。

  *目的是去除非特异性杂蛋白，可降低背景。

待续

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